| 研究課題/領域番号 |
15K08326
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| 研究機関 | 国立研究開発法人国立長寿医療研究センター |
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研究代表者 |
滝川 修 国立研究開発法人国立長寿医療研究センター, ラジオアイソトープ管理室, 客員研究員 (70163342)
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| 研究分担者 |
奥野 海良人 国立研究開発法人国立長寿医療研究センター, ラジオアイソトープ管理室, 特任研究員 (50623980)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 代謝異常学 / アルツハイマー病 / 疾患エクソソーム |
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| 研究実績の概要 |
ヒト神経細胞およびサストロサイト由来のエクソソーム単離技術の開発
(1)神経細胞由来エクソソーム：2014年に報告された米国UCSFのGoeztlらが開発した方法の追試を行った。具体的には市販のヒトプール血漿からビオチン化抗L１CAM抗体とストレプトアビジン化ビーズで沈降したエクソソームについて、神経細胞のマーカーのγ-エノラーゼの比活性の増加を指標に検討を行った。その結果、沈降してきたエクソソームは論文に報告されているように約10倍のγ-エノラーゼの比活性の増加を示し再現性を確認できた。
(2)アストロサイト由来エクソソーム：文献調査から見出したアストロサイト特異的な表面マーカーXに対するビオチン化抗体とストレプトアビジン化ビーズで沈降を試みた。当該エクソソームであることの確認はアストロサイトに特異的なY酵素の比活性の増加で行った。その結果、沈降してきたエクソソームに含まれるY酵素の比活性の増加を見るにはまだ至っていない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
神経細胞由来エクソソームの単離技術の開発は順調に進み、当初のマイルストーンは達成した。しかし、アストロサイト由来エクソソームの単離技術の開発は研究実績の概要に述べたように確立しておらず、当初の計画より遅れているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
神経細胞由来のエクソソームのオミックス解析の実施
平成27年度に確立したビーズ法で国立長寿医療研究センターのバイオバンクに収集された患者サンプルから単離・濃縮した神経細胞由来の血漿エクソソームについては当初の計画通り下記の多層的（3層）オミックス解析を実施する。１）トランスクリプトーム解析（miRNAの網羅的解析）、２）メタボロミクス（イオン性メタボライトおよび脂溶性成分の網羅的解析及び３）プロテオミクス（蛋白成分の網羅的解析）である。解析する検体数は年齢をマッチさせた健常人、軽度認知症、ADの3群、何れも各n=20例（男女比は同一とする）とする。データの統計処理の結果に応じて、検体数の増加も検討する。
アストロサイト由来エクソソーム単離技術の継続
平成27年度に使用したアストロサイト特異的な表面マーカーXに対する市販抗体も含めて、複数の抗体を使用して市販の血漿を使用して単離技術の開発を継続する。また、平行して文献調査を行い、アストロサイト特異的な別の表面マーカーを選び、同様にアストロサイトに特異的なY酵素の比活性の増加で単離・濃縮を検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初予定していた学会参加を中止したためと、当初予想したより神経細胞由来エクソソームの単離技術の追試がスムーズに進み、物品費（抗体等の消耗品）が少額となったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成27年度から繰り越した研究費はアストロサイト由来エクソソーム単離技術の開発（継続）に使用する。具体的には抗体の種類を増やし、多くの沈降条件の検討を行うため物品費とそのために発生する人件費に充当する予定である。
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