研究課題
(1) EBI3/p19-トランスジェニック(Tg)マウスを用いた生体内での役割とその作用機序:肝臓特異的なプロモーターを用いて発現量の異なるFLAGタグ付き一本鎖EBI3/p19を発現する2系統のTgマウスを作製した。発現量は、肝臓の細胞溶解液の抗FLAG抗体を用いたウエスタンブロット解析より、10倍ぐらい発現量の違いがあることがわかった。次に、コンカナバリンA投与で誘導される自己免疫性肝炎モデルを用いて、血中のトランスアミナーゼ(GOTとGPT)活性測定と肝臓の組織学的解析により肝傷害の程度を比較したところ、EBI3/p19の発現量依存的にGOT/GPT活性や炎症が軽減することがわかった。また、野生型マウスを卵白アルブミンで免疫しEBI3/p19の発現ベクターをHydrodynamic injection法により投与し、1週間後所属リンパ節を卵白アルブミンで再刺激すると、IL-17やGM-CSFなどのTh17サイトカインの産生が増強された。(2) 機能的な組換え精製EBI3/p19蛋白質の作製:HEK293T細胞にFLAGタグ付きの一本鎖EBI3/p19発現ベクターを遺伝子導入し、その培養上清中を抗FLAG抗体カラムを用いて、組換え一本鎖EBI3/p19精製蛋白質を調製した。次に、EBI3/p19のレセプターとして想定されるgp130およびIL-23Raを強制発現したBa/F3細胞の増殖誘導能を調べたところ、IL-27およびIL-23では細胞増殖を誘導できたが、上述のEBI3/p19精製蛋白質では、細胞増殖を誘導できなかった。現在、さらに、レセプターが何か等について検討中である。
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