研究課題
CRISPR/CAS9は核ゲノムの編集技術として幅広い生物種において適用されている。本技術をオルガネラゲノムの編集技術へ応用することを目的とする。現行のCAS9は、N末とC末に核移行シグナルが付加されており、CAS9が核へ移行して核遺伝子の組換えを行っている。本年度は、CAS9に”オルガネラ移行シグナル”を付加することでCAS9をオルガネラへ移行させることを着想した。具体的にはCAS9の核移行シグナルをアピコプラスト（Api）、およびミトコンドリア（Mit）移行シグナルに置き換えることで、CAS9をそれぞれのオルガネラへ移行させることを試みた。申請者がすでに報告済のネズミマラリア原虫（Plasmodium berghei）のMit移行シグナル（J. Biochem., 2012）、およびApi 移行シグナルで核移行シグナルを置き換えたCAS9プラスミドを構築した。
3: やや遅れている
プラスミド構築に時間を要したことから、プラスミドを用いた組み換え原虫の作成を27年度内に実施することができなかった。
27年度に作成したプラスミドをネズミマラリア原虫に導入し、組換原虫を作成する。
遺伝子導入に使用するためのプラスミド作成に時間を要したことから実験が遅延した。
27年度で未使用分の予算を活用し、作成したプラスミドを用いた組換原虫作成、それに続いた機能解析を行なう。さらに、得られた成果を論文化するための英文校閲費用、投稿料に当てる。
すべて 2016 2015
すべて 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 2件、 査読あり 2件、 オープンアクセス 2件)
Expert Rev Anti Infect Ther
巻: 14 ページ: 123-135
10.1586/14787210.2016.1106938
Sci Rep.
巻: 5 ページ: 15699
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