| 研究課題/領域番号 |
15K08486
|
|---|
| 研究機関 | 国立感染症研究所 |
|---|
研究代表者 |
伊豫田 淳 国立感染症研究所, その他部局等, その他 (70300928)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2015-10-21 – 2019-03-31
|
| キーワード | 腸管出血性大腸菌 / 接着因子 |
|---|
| 研究実績の概要 |
日本国内で血便、HUS、脳症発症者などの重症例から分離される腸管出血性大腸菌（enterohemorrhagic Escherichia coli: EHEC）の多くは染色体上にLEEと呼ばれる病原性遺伝子群を保有する。我々のこれまでの国内分離株の解析から、重症例由来株のうちで既知の蛋白質性接着因子（Intimin, Saa, Eib）を保有しない非典型的なEHEC株をスクリーニングしたところ、その一部が特定の血清型に属することが明らかとなった。このうちの一部の菌株を用いて、トランスポゾームシステム（Epicentre社, EZ-Tn5 transposome kit）を用いてトランスポゾン挿入株のライブラリーを作成後、培養細胞（HEp-2）への接着能が変化した株を96-wellプレートを用いてスクリーニングしたところ、同一繊毛遺伝子群にTn5が挿入されている変異株が複数単離され、HEp-2細胞への接着能が低下または上昇していることが明らかとなった。現在、Tn5が挿入されていた遺伝子のいくつかについて完全欠失株をλ Red recombinaseのシステムで構築すると共に、低コピーのプラスミドを用いた相補株を構築して表現型の確認を行っている。
その他の血清型に属する重症例由来のEHEC株についても保有する病原性遺伝子の分布について解析を進めたところ、少なくとも1株がEHEC以外の下痢原性大腸菌カテゴリーに共通に存在する病原性遺伝子を保有するハイブリッドタイプであることが明らかとなった。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
トランスポゾン挿入変異による約3,000株のスクリーニングの結果、培養細胞への接着性が変化した変異株の複数で同一繊毛遺伝子群にトランスポゾンが挿入されていることが明らかとなった。従って、本スクリーニングはほぼ飽和しており、今後これらの繊毛遺伝子群が宿主細胞への接着に関わる可能性について詳細に検討したいと考えている。
その他の重症例由来EHEC株の解析から、EHEC以外の下痢原性大腸菌カテゴリーに共通に存在する病原性遺伝子を保有するハイブリッドタイプが存在することが明らかとなったため、これらの解析についても並行して進める予定である。
|
| 今後の研究の推進方策 |
本研究から同定される接着遺伝子が新規の場合には、それらを検出するPCR系を確立する予定である。このPCR検出系を用いて、すべてのLEE非保有型EHEC、およびLEE保有型の代表株における分布解析を行うと共に、EHEC以外のカテゴリーの下痢原性大腸菌における分布解析を行う。分布解析の結果、新規接着遺伝子が陽性となった大腸菌について血清型、ゲノム解析による系統解析を行い、同定した新規接着遺伝子を保有する大腸菌の遺伝学的背景について明らかにする。
その他の重症例由来EHEC株の解析から、EHEC以外の下痢原性大腸菌カテゴリーに共通に存在する病原性遺伝子（接着遺伝子）を保有するハイブリッドタイプが存在することが明らかとなったため、これらの解析についても並行して進める予定である。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
年度末納品等にかかる支払いが平成28年4月1日以降となったため、
当該支出分については次年度の実支出額に計上予定。
平成27年度分についてはほぼ使用済みである。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
上記のとおり。
|
