| 研究課題/領域番号 |
15K08498
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
團迫 浩方 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (80379841)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | C型肝炎ウイルス / 自然免疫応答 / NK細胞 / NKG2Dリガンド / ヒト不死化肝細胞 / 細胞障害性 / IFN-gamma |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、肝炎ウイルス感染に対するナチュラルキラー（NK）細胞の自然免疫応答の全体像を明らかにするため、研究期間内に以下の３項目を検討する予定にしている。
（項目１）NK細胞による肝炎ウイルス感染肝細胞の認識機構（平成２７年度）
（項目２）NK細胞が肝炎ウイルスを排除する機構（平成２８年度）
（項目３）肝炎ウイルスが持続感染するためにNK細胞に対する抑制機構（平成２９年度）
前年度（平成２７年度）は、項目１を遂行した。最初に、全てのHCVタンパク質を恒常的に発現するヒト不死化PH5CH8細胞（PH5CH8 C-NS2/NS3-5B細胞）を作成し、この細胞内で変動するNKG2Dリガンドの同定を行った。その結果、あるNKG2Dリガンド（論文準備中のため、Xとする）の遺伝子レベルが変動していることを見出した。本年度（平成２８年度）はNKG2DリガンドXを介したNK細胞活性化機構や、活性化されたNK細胞がHCVを排除する機構を明らかにすることを試みた（項目２）。最初に、NKG2DリガンドXがPH5CH8 C-NS2/NS3-5B細胞の細胞表面に発現していることをフローサイトメーターにより明らかにした。PH5CH8 C-NS2/NS3-5B細胞とNK細胞株NK-92の共培養はNK-92細胞による細胞障害性を亢進した。また、肝がん細胞株HuH-7細胞由来RSc細胞でのHCV感染もNKG2DリガンドXの遺伝子レベルや細胞表面発現を亢進することを明らかにした。HCV感染RSc細胞とNK-92細胞との共培養は細胞障害性やIFN-gammaの誘導を亢進した。これらの結果は、HCVはNKG2DリガンドXの細胞表面発現を亢進することにより、NK細胞により認識されることを示唆している。さらに、NK細胞は細胞障害性やIFN-gammaの誘導により、HCV感染細胞を攻撃しているものと考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究の柱である３項目のうち、項目１（平成２７年度遂行）と項目２（平成２８年度遂行）は当初の計画どおり順調に進展している。前年度（平成２７年度）は、HCVにより発現変動するNKG2Dリガンド（論文準備中のため、Xとする）を同定することができた。本年度（平成２８年度）は、HCVがNKG2DリガンドXの細胞表面発現を亢進することにより、NK細胞により認識されることを明らかにした。また、NK細胞が細胞障害性やIFN-gammaの誘導により、HCV感染細胞を攻撃していることも明らかにした。現在、これらの結果をまとめて、論文準備に取りかかっている。このように、現在までの進捗状況は概ね順調である。
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| 今後の研究の推進方策 |
前年度（平成２７年度）と本年度（平成２８年度）共に、当初の計画どおり順調に進展している。そのため、最終年度（平成２９年度）も当初の計画どおり、研究を遂行する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度の当初の研究計画では、NK細胞が肝炎ウイルスを排除する機構として、（１）NK細胞による細胞障害性やIFN-gamma産生によるもの、あるいは（２）NK細胞から産生されたexosome内のmiRNAや抗ウイルス分子によるもの、を想定していた。しかし、本年度の研究成果から、NK細胞はHCV感染細胞と接触後、細胞障害性やIFN-gamma産生を誘導することが明らかとなった。そのため、(2)の解析にかかるexosome抽出キット（20万円と計上）、ヒト初代肝細胞（20万円と計上）、miRNA array解析（20万円と計上）やMir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit（5万円と計上）などの購入は中止した（合計約100万円）。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度の研究計画では、HCV感染肝細胞から産生されるexosomeによるNK細胞の機能に対する影響を解析する予定にしている。そのため、exosomeの抽出に必要なキット類の購入を増額させることにした（30万円増額）。また、exosome内のmRNAやmiRNAを網羅的に解析するためのcDNAマイクロアレイ解析（35万円と計上）やmiRNA array解析（35万円と計上）にかかる費用にも充当することとした。
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