遺伝子操作系を用いたロタウイルス感染性および病原性の獲得機構の解明

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K08505
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 河本 聡志 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (60367711)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: ロタウイルス / リバースジェネティクス

研究実績の概要

殆どのDNAおよびRNAウイルスではcDNAから感染性ウイルスを人工合成することを可能とする遺伝子操作系（リバースジェネティクス系）が活用されているが、重要な下痢症ウイルスであるロタウイルスにおいては、その開発が困難を極めた。私たちは、ヘルパーウイルスを用いる系ではあるが、その開発に世界に先駆けて成功した。一方で、この系は回収ウイルスから組換えウイルスを単離するための強力な選択条件が必要であり、変異導入で増殖能が大きく低下した変異ウイルスの回収は困難である。そこで、現在のシステムを発展させ、全11本のゲノム分節がcDNA由来の感染性ロタウイルスを作出する技術の樹立を目指している。実験室株であるサルロタウイルスSA11株とヒトロタウイルスKU株について各々11個のT7プラスミド（T7 RNAプロモータ下流にロタウイルス遺伝子を配置）を構築した。これらプラスミド上のロタウイルスシーケンスを慎重に検討した上で、様々な条件下でT7 RNAポリメラーゼを発現する培養細胞株に導入することでcDNA由来ロタウイルスの作出を試みている。プラスミド上で一部のゲノム分節に遺伝子マーカーとなるサイレント変異を導入することで、回収されるcDNA由来ロタウイルスと実際の親株との区別が可能となる。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

構築したT7プラスミドをT7 RNAポリメラーゼを発現する培養細胞に導入することで、cDNA由来のロタウイルス作出を試み始めたところで、未だウイルス回収の成功には至っていない。

今後の研究の推進方策

T7プラスミドを培養細胞に導入する際の各種条件が整ってきたので、これまで以上のペースでcDNA由来ロタウイルスの作出と回収を精力的に試みる。

次年度使用額が生じた理由

当該年度はプラスミド調製が主であったために、高価な試薬類を大量に使用する回数が少なく、次年度使用額が生じた。

次年度使用額の使用計画

次年度は、構築したプラスミドを培養細胞に導入する実験が中心となるため、大量の高価なトランスフェクション試薬と細胞培養器具および試薬のために、次年度使用額をあわせて使用する。

研究成果

• [雑誌論文] Monthly Distribution of Norovirus and Sapovirus in Viral Gastroenteritis in Thailand (2016)
  • 著者名/発表者名: Pongsuwanna Y, Tacharoenmuang R, Prapanpoj M, Sakon N, Komoto S, Guntapong R, Taniguchi K.
  • 雑誌名: Jpn J Infect Dis 巻: Epub ahead of print ページ: 印刷中
  • DOI: 10.7883/yoke n.JJID.2015.440
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Reassortment of Human and Animal Rotavirus Gene Segments in Emerging DS-1-Like G1P[8] Rotavirus Strains (2016)
  • 著者名/発表者名: Komoto S, Tacharoenmuang R, Guntapong R, Ide T, Tsuji T, Yoshikawa T, Tharmaphornpilas P, Sangkitporn S, Taniguchi K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 11(2) ページ: e0148416
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0148416
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Emergence and Characterization of Unusual DS-1-Like G1P[8] Rotavirus Strains in Children with Diarrhea in Thailand (2015)
  • 著者名/発表者名: Komoto S, Tacharoenmuang R, Guntapong R, Ide T, Haga K, Katayama K, Kato T, Ouchi Y, Kurahashi H, Tsuji T, Sangkitporn S, Taniguchi K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10(11) ページ: e0141739
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0141739
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Whole Genomic Analysis of an Unusual Human G6P[14] Rotavirus Strain Isolated from a Child with Diarrhea in Thailand: Evidence for Bovine-To-Human Interspecies Transmission and Reassortment Events (2015)
  • 著者名/発表者名: Tacharoenmuang R, Komoto S, Guntapong R, Ide T, Haga K, Katayama K, Kato T, Ouchi Y, Kurahashi H, Tsuji T, Sangkitporn S, Taniguchi K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10(9) ページ: e0139381
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0139381
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] High prevalence of G12 human rotaviruses in children with gastroenteritis in Myanmar (2015)
  • 著者名/発表者名: Ide T, Higo-Moriguchi K, Komoto S, Htun KW, Myint YY, Myat TW, Thant KZ, Thu HM, Win MM, Oo HN, Htut T, Rahman S, Nguyen SV, Umeda K, Oguma K, Tsuji T, Taniguchi K.
  • 雑誌名: Jpn J Infect Dis 巻: Epub ahead of print ページ: 印刷中
  • DOI: 10.7883/yoke n.JJID.2015.267
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Whole Genomic Analysis of Human G12P[6] and G12P[8] Rotavirus Strains that Have Emerged in Myanmar (2015)
  • 著者名/発表者名: Ide T, Komoto S, Higo-Moriguchi K, Htun KW, Myint YY, Myat TW, Thant KZ, Thu HM, Win MM, Oo HN, Htut T, Wakuda M, Dennis FE, Haga K, Fujii Y, Katayama K, Rahman S, Nguyen SV, Umeda K, Oguma K, Tsuji T, Taniguchi K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10(5) ページ: e0124965
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0124965
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] Rotavirus genomic rearrangement impairs packaging efficiency into progeny viruses despite does not confer growth disadvantage to viruses (2015)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Komoto, Tomihiko Ide, Koki Taniguchi.
  • 学会等名: 第63回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2015-11-22 – 2015-11-24
• [学会発表] Characterization of an unusual human G6P[14] rotavirus strain identified from a child with diarrhea in Thailand (2015)
  • 著者名/発表者名: Tomihiko Ide, Satoshi Komoto, Kei Haga, Kazuhiko Katayama, Takao Tsuji, Koki Taniguchi.
  • 学会等名: 第63回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2015-11-22 – 2015-11-24