内皮細胞特異的スプライシングバリアントからアプローチする癌微小環境の分子病態解析

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K08973
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 山本 英一郎 札幌医科大学, 医学部, 助教 (60567915)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 腫瘍血管 / 遺伝子発現 / 大腸がん

研究実績の概要

大腸がんの増殖・浸潤・転移に関わる血管新生メカニズムの解明を目的としている。大腸がんおよび対照非がん部臨床検体より内皮細胞特異的抗原を用いて内皮細胞を分離してRNAを抽出後、Illumina Hi-Seqを用いたRNA-シークエンス法によるトランスクリプトーム解析から新規TEC関連遺伝子、スプライスバリアント(SV)を多数同定した。がん間質内皮細胞（Tumor associated Endothelial Cells, TECs）特異的に発現亢進する遺伝子の一つである転写因子Aは定量PCR解析および免疫組織学的染色でTECに特異的に発現することを明らかにし、さらにヒト正常血管内皮細胞(HUVEC)を大腸がん細胞培養上清で刺激することで発現誘導されることが確認できた。またヒト血管内皮細胞(HUVEC)を用いた予備実験の結果、転写因子AをノックダウンすることでHUVECの増殖およびチューブ形成能を阻害すること、また細胞周期関連遺伝子の発現が顕著に変動することが明らかとなった。TECsに特異的なスプライシングバリアント候補遺伝子を絞り込み、現在定量PCR解析で多数の臨床検体で検証している。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

本年度の目標としていた、臨床検体からの内皮細胞の分離、新規TEC関連遺伝子、スプライスバリアント(SV)の絞り込みができた。

今後の研究の推進方策

新規TEC関連遺伝子、スプライスバリアント(SV)の機能解析を予定通り進める。in vitro実験モデルを作成し候補遺伝子の過剰発現、ノックダウンによる血管新生・細胞増殖への影響を検討する。次にin vivoにおける機能解析を計画する。

次年度使用額が生じた理由

順調に研究計画が進んだ

次年度使用額の使用計画

次年度の機能解析により使用することで研究成果が得られることが期待できる

研究成果

• [雑誌論文] Clinicopathological and molecular alterations in early gastric cancers with the microsatellite instability-high phenotype (2016)
  • 著者名/発表者名: Sugimoto R, Sugai T, Habano W, Endoh M, Eizuka M, Yamamoto E, Uesugi N, Ishida K, Kawasaki T, Matsumoto T, Suzuki H.
  • 雑誌名: Int J Cancer 巻: 1 ページ: 1689-97
  • DOI: 10.1002/ijc.29916
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epigenetic silencing of NTSR1 is associated with lateral and noninvasive growth of colorectal tumors (2015)
  • 著者名/発表者名: Kamimae S, Yamamoto E, Kai M, Niinuma T, Yamano HO, Nojima M, Yoshikawa K, Kimura T, Takagi R, Harada E, Harada T, Maruyama R, Sasaki Y, Tokino T, Shinomura Y, Sugai T, Imai K, Suzuki H
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 6 ページ: 29975-90
  • DOI: 10.18632/oncotarget.5034
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Low-Frequency IL23R Coding Variant Associated with Crohn's Disease Susceptibility in Japanese Subjects Identified by Personal Genomics Analysis (2015)
  • 著者名/発表者名: Onodera K, Arimura Y, Isshiki H, Kawakami K, Nagaishi K, Yamashita K, Yamamoto E, Niinuma T, Naishiro Y, Suzuki H, Imai K, Shinomura Y
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0137801
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0137801
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A Screen for Epigenetically Silenced microRNA Genes in Gastrointestinal Stromal Tumors. (2015)
  • 著者名/発表者名: Isosaka M, Niinuma T, Nojima M, Kai M, Yamamoto E, Maruyama R, Nobuoka T, Nishida T, Kanda T, Taguchi T, Hasegawa T, Tokino T, Hirata K, Suzuki H, Shinomura Y
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0133754
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0133754
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Aberrant TET1 Methylation Closely Associated with CpG Island Methylator Phenotype in Colorectal Cancer. (2015)
  • 著者名/発表者名: 5.Ichimura N, Shinjo K, An B, Shimizu Y, Yamao K, Ohka F, Katsushima K, Hatanaka A, Tojo M, Yamamoto E, Suzuki H, Ueda M, Kondo Y
  • 雑誌名: Cancer Prev Res (Phila) 巻: 10 ページ: 702-11
  • DOI: 10.1158/1940-6207.CAPR-14-0306.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analysis of methods to determine DNA methylation levels of a tumor-related microRNA gene. (2015)
  • 著者名/発表者名: Konishi Y, Hayashi H, Suzuki H, Yamamoto E, Sugisaki H, Higashimoto H.
  • 雑誌名: Anal Biochem 巻: 484 ページ: 66-71
  • DOI: 10.1016/j.ab.2015.05.003.
  • 査読あり
• [学会発表] Identification of tumor endothelium-related genes in colorectal cancer (2016)
  • 著者名/発表者名: Akira Yorozu, Yamamoto Eiichiro , Reo Maruyama, Masahiro Kai, Takeshi Niinuma, Tomohisa Furuhata, Tomohiko Nishidate, Tamotsu Sugai, Hiromu Suzuki.
  • 学会等名: Tenth AACR-JCA Joint Conference on Breakthroughs in Cancer Research: From Biology to Therapeutics
  • 発表場所: Maui, Hawaii, USA
  • 年月日: 2016-02-16 – 2016-02-20
  • 国際学会
• [学会発表] Identification of aberrant DNA methylation associated with the development of traditional serrated adenoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hironori Aoki, Eiichiro Yamamoto, Hiro-o Yamano, Takeshi Niinuma, Masahiro Kai, Reo Maruyama, Yasushi Adachi, Takao Endo, Tamotsu Sugai, Hiromu Suzuki.
  • 学会等名: Tenth AACR-JCA Joint Conference on Breakthroughs in Cancer Research: From Biology to Therapeutics
  • 発表場所: Maui, Hawaii, USA
  • 年月日: 2016-02-16 – 2016-02-20
  • 国際学会
• [学会発表] Possible role of TET1 dysregulation in inducing aberrant DNA methylation in colorectal cancer. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hiromu Suzuki, Masahiro Kai, Takeshi Niinuma, Eiichiro Yamamoto, Reo Maruyama, Akira Yorozu, Kohei Kumegawa, Hironori Aoki, Tetsuya Shindo, Takashi Tokino, Kohzoh Imai.
  • 学会等名: Tenth AACR-JCA Joint Conference on Breakthroughs in Cancer Research: From Biology to Therapeutics
  • 発表場所: Maui, Hawaii, USA
  • 年月日: 2016-02-16 – 2016-02-20
  • 国際学会
• [学会発表] Histone H3K27 trimethylation in normal colon is associated with development of colorectal tumor with CpG island methylator phenotype (2015)
  • 著者名/発表者名: Eiichiro Yamamoto, Hiroo Yamano, Tamotsu Sugai, Hiromu Suzuki
  • 学会等名: United European Gastroenterology Week 2015
  • 発表場所: Barcelona
  • 年月日: 2015-10-24 – 2015-10-29
  • 国際学会
• [学会発表] ENDOSCOPIC AND MOLECULAR FEATURES REVEAL PROGRESSION OF SERRATED LESIONS (2015)
  • 著者名/発表者名: Hironori Aoki, Eiichiro Yamamoto, Hiroo Yamano, Takao Endo, Tamotsu Sugai, Hiromu Suzuki
  • 学会等名: United European Gastroenterology Week 2015
  • 発表場所: Barcelona
  • 年月日: 2015-10-24 – 2015-10-29
  • 国際学会