骨髄由来肝臓修復細胞の同定

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K09005
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 山本 直樹 山口大学, 大学教育機構, 准教授 (90448283)
• 研究分担者: 藤澤 浩一 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (00448284) ; 高見 太郎 山口大学, 大学院医学系研究科, 講師 (60511251) ; 松本 俊彦 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (70634723)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 骨髄細胞 / 再生医療 / 肝硬変 / 幹細胞 / 培養骨髄細胞 / EpCAM

研究実績の概要

全骨髄細胞投与のGFP/CCl4モデルを作成し、骨髄細胞投与後の肝組織を浮遊切片法による高感度免疫電顕法とFEI社製の透過型電子顕微鏡Tecnai12BTと走査型電子顕微鏡Qunta3D FEG Dual Beamシステムを用いて二種類の骨髄由来肝臓修復細胞である核N/C比の高い小型細胞と類円形の大型細胞の形態学的変化を解析し、トモグラフィーによる微細構造と３Ｄ立体構造構築による解析で核N/C比の高い小型細胞群の中にEpCAM陽性細胞群とCXCR4陽性細胞群が含まれ、MMP9陽性細胞群との相違点を見つけ出した。
またGFP/CCl4モデルでの骨髄細胞投与後の肝組織をコラゲナーゼ還流し、EpCAM抗体,GFP抗体によるFACS解析で、EpCAM陽性GFP陽性骨髄由来細胞とCXCR4陽性GFP陽性骨髄由来細胞の割合を解析し培養等を試みたが殆どが解析中に死細胞となり培養し継代していくことが困難だった。
GFP陽性全骨髄細胞をEpCAM陽性・陰性群とCXCR4陽性・陰性群で予め分離し、それぞれの群を持続肝障害(CCl4)モデルに静脈投与し、その肝臓内での様々な細胞の形態や特徴や肝線維化の改善を解析した。結果としてEpCAM陽性群やCXCR4陽性群よりも陰性群投与群の方が肝線維化抑制効果を認めた。さらに全骨髄細胞投与群の方が肝線維化改善をさらに認めた。
またMMP9発現細胞標識トランスジェニック(MMP9/LacZ-DsRed Tg)マウスを開発したため、このマウスからの骨髄細胞を採取しCCl4肝線維化モデルに投与して、モデルでもMMP9陽性細胞の局在と発現を解析し、MMP9陽性細胞の増加を認めた。

研究成果

• [雑誌論文] Profiling of the circadian metabolome in thioacetamide-induced liver cirrhosis in mice. (2017)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa K, Takami T, Matsumoto T, Yamamoto N, Sakaida I.
  • 雑誌名: Hepatol Commun. 巻: 1(7) ページ: 704-718
  • DOI: 10.1002/hep4.1075.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A canine liver fibrosis model to develop a therapy for liver cirrhosis using cultured bone marrow-derived cells. (2017)
  • 著者名/発表者名: Matsuda T, Takami T, Sasaki R, Nishimura T, Aibe Y, Paredes BD, Quintanilha LF, Matsumoto T, Ishikawa T, Yamamoto N, Tani K, Terai S, Taura Y, Sakaida I.
  • 雑誌名: Hepatol Commun. 巻: 1(7) ページ: 691-703
  • DOI: 10.1002/hep4.1071.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Evaluating effects of L-carnitine on human bone-marrow-derived mesenchymal stem cells. (2017)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa K, Takami T, Fukui Y, Quintanilha LF, Matsumoto T, Yamamoto N, Sakaida I.
  • 雑誌名: Cell Tissue Res 巻: 368(2) ページ: 301-310
  • DOI: 10.1007/s00441-017-2569-0.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Effectiveness of tolvaptan monotherapy and low-dose furosemide/tolvaptan combination therapy for hepatoprotection and diuresis in a rat cirrhotic model. (2017)
  • 著者名/発表者名: Tanabe N, Takami T, Fujisawa K, Matsumoto T, Yamamoto N, Sakaida I.
  • 雑誌名: J Clin Biochem Nutr 巻: 61(1) ページ: 53-59
  • DOI: 10.3164/jcbn.16-122
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Evaluation of the effects of L-carnitine on medaka (Oryzias latipes) fatty liver. (2017)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa K, Takami T, Matsuzaki A, Matsumoto T, Yamamoto N, Terai S, Sakaida I.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 7(1) ページ: 2749-52.
  • DOI: 10.1038/s41598-017-02924-5.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Infused bone marrow derived cells have two capacities that repair of fibrosis and phagocytosis of damaged cells (2017)
  • 著者名/発表者名: Naoki Yamamoto,Taro Takami, Shuji Terai, Koichi Uchida, Koichi Fujisawa, Toshihiko Matsumoto, Hiroshi Nishina,Isao Sakaida.
  • 学会等名: The 14th Annual Meeting of the International Society for Stem Cell Research(ISSCR) Boston
  • 国際学会
• [学会発表] Nonclinical proof-of-concept for "hepatic artery infusion of cultured autologous bone marrow mesenchymal stem cells" in a canine liver fibrosis model (2017)
  • 著者名/発表者名: Tatsuro Nishimura, Taro Takami, Ryo Sasaki, Yuki Aibe, Takashi Matsuda, Toshihiko, Matsumoto, Koichi Fujisawa, Naoki Yamamoto, Isao Sakaida
  • 学会等名: The Liver Meeting 2017, AASLD Washington DC
  • 国際学会
• [学会発表] マクロファージRho family GTPaseを標的とした肝線維溶解療法に向けた基盤研究 (2017)
  • 著者名/発表者名: 松本 俊彦、仁志 麻衣子、藤澤 浩一、高見 太郎、山本 直樹、坂井田 功
  • 学会等名: 第53回日本肝臓学会総会 広島
• [学会発表] BCAA製剤によるSorafenibの治療効果増強と副作用軽減作用の解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 山本 直樹、高見 太郎、藤澤 浩一、松本 俊彦、内田 耕一、坂井田 功
  • 学会等名: 第53回日本肝臓学会総会 広島
• [学会発表] 骨髄間葉系幹細胞によるマクロファージMMP発現の制御 (2017)
  • 著者名/発表者名: 仁志 麻衣子、松本 俊彦、藤澤 浩一、高見 太郎、山本 直樹、坂井田 功
  • 学会等名: 第53回日本肝臓学会総会 広島
• [学会発表] イヌ線維化評価モデルによる培養自己骨髄間葉系幹細胞肝動脈投与の非臨床Proof of Conceptの取得 (2017)
  • 著者名/発表者名: 西村 達朗、高見 太郎、佐々木 嶺、相部 祐希、松田 崇史、山本 直樹、坂井田 功
  • 学会等名: 第53回日本肝臓学会総会 広島
• [備考]
  • URL: http://www.ichinai-yamaguchi.jp/contents1/detail.php?id=58