| 研究課題/領域番号 |
15K09024
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| 研究機関 | 東京医科大学 |
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研究代表者 |
中村 郁夫 東京医科大学, 医学部, 准教授 (40251243)
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| 研究分担者 |
中島 利博 東京医科大学, 医学部, 教授 (90260752)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 非アルコール性脂肪性肝炎 / 肝線維化 |
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| 研究実績の概要 |
非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)の肝線維化に果たすSynoviolinの役割を、マウスモデルを用いた研究により解明することが本研究の目的である。Synoviolinは、共同研究者らにより関節リウマチの病態形成に重要な役割を果たしている滑膜細胞に因んだ遺伝子として、世界で初めてクローニングされたERタンパクである。NASHの動物モデルの一つとして、まず、C57BL/6マウスに対する生後3日でのstreptozotocinを投与により1型糖尿病を起こし、さらに、生後6週から高脂肪食を与えることによるNASHを起こさせるマウスモデルが確立されている。同モデルを用いて、Synoviolinの特異的阻害剤であるLS-102を投与することにより、Synoviolinの作用の抑制がNASHにおける肝線維化の進行を抑制できる可能性について検証する。
初年度である平成27年度は、まずLS-102の投与濃度、投与期間に関する検討を行った。その結果、生後6週から生後11週までLS-102を週１回投与し、生後12週に肝臓を摘出することとした。そこで得られた肝組織標本を用いて、病理学的な肝線維化の程度の評価を行い、LS-102投与群と非投与群で比較検討している。
これらの検討結果は、次年度以降の研究を進める上で有用であると考えられる。次年度は、さらに病理学的な肝線維化程度の評価に加えて、さらに、抗Synoviolin抗体・抗α-SMA抗体などの各種抗体を用いた免疫染色を行い、同様にLS-102投与群と非投与群の間で比較検討する。その結果の解析により、LS-102の投与によりSynoviolinの作用を抑制することが、NASHマウスモデルにおける肝線維化を低下させることを明らかにする。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
応募時に記載した研究計画・方法に基づいて、C57BL/6マウスに対する生後3日でのstreptozotocinを投与により1型糖尿病を起こし、さらに、生後6週から高脂肪食を与えることによってNASHを起こさせるマウスモデルを用いた。さらに、LS-102の投与濃度、投与期間に関する検討を行い。その結果、生後6週から生後11週までLS-102を週１回投与し、生後12週に肝臓を摘出することとした。そこで得られた肝組織標本を用いて、病理学的な肝線維化の程度の評価を行い、LS-102投与群と非投与群で比較検討している。現在までの進捗状況は、おおむね順調に進展していると評価する。
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| 今後の研究の推進方策 |
非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)の肝線維化に果たすSynoviolinの役割を、マウスモデルを用いた研究により解明することが本研究の目的である。NASHマウスモデルにLS-102を投与したマウスで、生後12週において肝臓を摘出し、まず肝組織の線維化程度の評価を行う。そして、LS-102投与群と非投与群で比較検討する。この検討には、病理学的な評価（肝脂肪化、肝細胞のbalooning、肝の炎症、肝線維化の程度の評価）に加えて、線維化の定量化を試みて比較する。LS-102投与群において非投与群と比較して、線維化の抑制が認めれた場合には、さらに、抗Synoviolin抗体・抗α-SMA抗体などの各種抗体を用いた免疫染色を行い、同様にLS-102投与群と非投与群の間で比較検討する。
引き続き、生後9週・10週・11週において肝臓を摘出し、まず肝組織の線維化程度の評価を行う。そして、LS-102投与群と非投与群で比較検討する。その結果の解析により、LS-102の投与によりSynoviolinの作用を抑制することが、NASHマウスモデルにおける肝線維化を低下させることを明らかにする。
上記研究の結果が計画通り進まない場合には、応募者らが既に樹立している、アルブミンプロモーターにドライブされるCreを用いた肝臓特異的Synoviolinノックアウトマウスを用いて、NASHモデルの解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
生後12週で摘出したマウスの肝臓を用いた病理標本（HE染色、銀染色、Elastica van Gieson染色）の作成が遅れたため、次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
NASHマウスモデルにLS-102を投与したマウスで、生後12週において肝臓を摘出し、まず肝組織の線維化程度の評価を行う。そして、LS-102投与群と非投与群で比較検討する。この検討には、病理学的な評価（肝脂肪化、肝細胞のbalooning、肝の炎症、肝線維化の程度の評価）に加えて、線維化の定量化を試みて比較する。
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