| 研究課題/領域番号 |
15K09152
|
|---|
| 研究機関 | 群馬大学 |
|---|
研究代表者 |
小和瀬 桂子 群馬大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (50594264)
|
|---|
| 研究分担者 |
倉林 正彦 群馬大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00215047)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| キーワード | 分子血管学 / 肺高血圧症 / 血管平滑筋 |
|---|
| 研究実績の概要 |
肺動脈高血圧症(PAH)の病態には、transforming growth factor (TGF)-betaとbone morphogenic protein 2 (BMP2)シグナルの不均衡という説が有力である。また、近年、osteoprotegerine (OPG)が血管病変形成に関与することが示されており、PAHにおいては、OPGが肺動脈リモデリングを促進させることなどが報告されている。本研究は、血管平滑筋の形質変換や分化誘導の調節異常との観点から、PAHの発症と進展における、ユビキチン様修飾（SUMO)や、SUMO化E3リガーゼのprotein inhibitor of activated STAT 1 (PIAS1)の病理生理学的意義を解明することを目的とした。
今回、私達は、低酸素刺激に加え、VEGF受容体抗体を腹腔内投与することにより、よりヒト肺高血圧の病態に近いマウスモデルを作製した。このモデルマウスを用い、肺組織における平滑筋分化マーカーと、TGFbetaRII、Notch1、OPG、SUMO1の発現を、主に免疫組織染色法を用いて検討した。また、ヒトOPGプロモーター・レポーターコンストラクトを作製し、ルシフェラーゼアッセイを行った。さらに、さらに、PASMCにおいて、siRNAを用いて内因性PIAS1発現をknockdown することにより、OPGの発現が抑制されることを示した。また、現在、SUMO化E3リガーゼ活性をもつPIAS1や、E2リガーゼ活性を持つubc9のアデノウイスルベクターを作成中である。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
PASMCにおいて、平滑筋分化マーカーの発現誘導機序を検討するために、種々の平滑筋分化マーカーのプロモーター・レポーターコンストラクトを用い、ルシフェラーゼアッセイ法にて、リガンドの反応部位を検討した。しかし、PASMCにおいては、トランスフェクション効率が悪く、これらについて有意な差を認めることが出来なかった。
また、SUMO化E3リガーゼ活性をもつPIAS1の肺高血圧部位での発現を明らかにすることを目的とし、肺高血圧モデルマウスを作製し、平滑筋マーカーやOPG,SUMO１、PIAS1の発現を免疫組織染色にて検討した。しかし、市販のPIAS１抗体は非特異的に反応してしまうため、使用することが出来なかった。そのため、PIAS1の抗体作成を試みたが、PIAS1に特異的な適切な抗体の作成には至らなかったため、現在検討中である。
|
| 今後の研究の推進方策 |
現在、SUMO化E3リガーゼ活性をもつPIAS1や、E2リガーゼ活性を持つubc9のアデノウイスルベクターを作成中である。これらのアデノウイルスベクターを低酸素誘発肺高血圧モデルマウスに投与し、SUMO化を促進することによって、モデルマウスの肺高血圧発症に対する影響を検討する。また、組織所見、平滑筋分化マーカー、NotchシグナルやTGFbetaシグナルを含む各血管平滑筋分化誘導因子やOPG等の発現の局在、変化を、免疫組織学的染色や、in situハイブリダイゼーションを用いて検討する。
また、呼吸器疾患症例の血清OPGを測定し、肺高血圧症におけるOPGのバイオマーカーとしての有用性を検討することを目的とし、観察研究を行っている。今後、症例数を増やして、さらに検討する予定である。
|
