| 研究課題/領域番号 |
15K09214
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| 研究機関 | 浜松医科大学 |
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研究代表者 |
須田 隆文 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30291397)
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| 研究分担者 |
榎本 紀之 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (50436961)
中村 祐太郎 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (60436962)
永田 年 浜松医科大学, 医学部, 教授 (90275024)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 樹状細胞 / ワクチン / 結核 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度は，当初の予定を一部変更して生分解性ポリマーであるpolylactic coglycolic acid（PLGA）を用いたナノ粒子（生分解性ナノ粒子，biodegradable nanoparticles）に効率よくCTL epitopeペプチドをコートする方法を今一度探索した．様々な方法で，CTLペプチド抗原をPLGA粒子（CTL-P-PLGA）をコートし，最も適した方法を発見することが出来た．そして，このCTL-P-PLGAを，マウス骨髄由来の樹状細胞（BMDC）にパルスし，in vitroでのCTL誘導能を検討した．ペプチドは卵白アルブミン（OVA）のCTL epitope（OVA257-264, SIINFEKL）を用い，OT-Iマウスの脾臓由来のnaive T細胞を標的にして，その増殖能，IFN-gamma産生能を評価した．その結果，OVA257-264ペプチドをコートしたPLGAをパルスしたBMDCは，標的細胞の増殖と共に，IFN-gammaを産生を誘導することが確認できた．
次に，OVAタンパクそのものを，PLGAに効率よくコートする方法を探索した．種々の超遠心法などを使った方法を試み，最も効率よくOVAタンパクをコードする方法を見出した．そして，この方法を用いてPLGAにOVAタンパクをコードしたPLGAを作成し，BMDCにパルスした上で，in vitroで，OT-IマウスとOT-IIマウス由来の脾細胞のnaive T細胞とそれぞれを標的細胞として共培養し，その増殖能，IFN-gamma産生能を評価した．その結果，OVA257-264ペプチドをコートしたPLGAをパルスしたBMDCは，OT-IとOT-II両者のnaive T細胞の増殖と共に，IFN-gammaを産生を誘導することが確認できた．
以上より，本課題の仮説，つまり，抗原タンパクをコートしたPLGAをパルスしたDCが，クロスプレゼンテーションを介して，CD4とCD8陽性T細胞の両者を誘導できることが確認された．今後は，昨年のやり残した結核菌由来のhelper ならびにCTL epitopeペプチド，そしてＡｇ85などの感染防御タンパクを用いて，同様の実験を予定している．
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