| 研究課題/領域番号 |
15K09228
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| 研究機関 | 埼玉医科大学 |
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研究代表者 |
中込 一之 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (60401113)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 好酸球 |
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| 研究実績の概要 |
緒言: 喘息はコントロール良好な疾患となったが、喘息増悪は今でもしばしば見られ、増悪の予防及び治療法の確立は重要と考えられる。重症喘息では「治療下でもしばしば増悪」するが、その過程で好酸球性炎症と好中球性炎症が連動し、治療抵抗性を獲得する。今年度は、好酸球性炎症のバイオマーカーとされているペリオスチンが、好酸球機能を活性化させるかについて検討した。
方法: 健常人及びアレルギー患者の末梢血好酸球を使用した。好酸球は、デキストラン、Percoll液、及びimmunomagnetic beadsによるnegative selectionにて分離した。好酸球接着反応は、残存好酸球ペルオキシダーゼ測定法で測定した。好酸球の活性酸素産生は、チトクロームC還元法により測定した。培養上清におけるeosinophil-derived neurotoxin (EDN)濃度とサイトカイン濃度を測定し、前者を好酸球脱顆粒の指標とした。
結果: ペリオスリンは、好酸球の接着を誘導し、活性酸素産生及びEDN放出を亢進させた。これらの反応は抗αM integrin抗体及び抗β2 integrin抗体の前処置で抑制された。ペリオスチンは、好酸球からのtransforming growth factor (TGF)-β1産生を亢進させた。
考察: 今研究からは、ペリオスチンが好酸球性炎症のバイオマーカーであるだけでなく、好酸球機能を直接活性化させることが明らかとなった。またペリオスチンは、好酸球からのTGF-β産生を亢進させ、気道リモデリングを悪化させることが示唆された。好酸球性炎症が存在すると喘息は増悪しやすいことが報告されており、ペリオスチンによる好酸球機能の活性化が喘息増悪に関与する可能性が考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
前述の研究実績だけでなく、現在以下のプロジェクトが進行中であり、研究全体ではやや遅れていると思われる。
①好酸球性炎症及び好中球性炎症がライノウィルス(RV)感染に与える影響(RV感染の重症化を規定する要因の解明): RV感染の系で、副鼻腔炎の種類(好中球優位、好酸球優位)で、ウィルス複製能や炎症惹起能力などに差があるか検討する。好酸球性副鼻腔炎及び好中球性副鼻腔炎から得られた副鼻腔上皮細胞を、air-liquid interfaceで培養し、完全に分化させたあと、臨床株RV(RV-A16, B52, C15)を感染させ、上皮細胞におけるウィルス量及び培養液のサイトカイン・ケモカイン濃度を、RT-PCRまたはELISAで測定する。
②Cadherin related family member (CDHR)3の好酸球機能に対する影響: CDHR3は、重度の喘息増悪に関係するとされるRV-Cの受容体である。好酸球は、デキストラン、Percoll液、及びimmunomagnetic beadsによるnegative selectionにて分離する。CDHR3でcoatしたplateとincubateし、残存好酸球ペルオキシダーゼ測定法で接着反応を測定する。またチトクロームC還元法を用い、活性酸素産生能を測定し、CDHR3の好酸球のeffector機能に対する直接的効果を検討する。
③抗コリン薬や糖尿病薬の好中球性気道炎症に対する効果: 喫煙や肥満は、重症喘息における好中球性炎症に関与する可能性が指摘されている。実地臨床では、喫煙の伴う慢性閉塞性肺疾患(COPD)には抗コリン薬が、肥満に伴う糖尿病には糖尿病薬が使用される。これらの薬のマウス好中球性気道炎症に対する効果を検討する。
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| 今後の研究の推進方策 |
①好酸球性炎症及び好中球性炎症がRV感染に与える影響(RV感染の重症化を規定する要因の解明)。今後、副鼻腔炎の種類(好中球優位、好酸球優位)で、ウィルス複製能や炎症惹起能力などに差があるか検討する予定である。
②CDHR3の好酸球機能に対する影響。今後、好酸球機能に対する影響を検討する予定である。
③抗コリン薬や糖尿病薬の好中球性気道炎症に対する効果。今後、マウス好中球性気道炎症モデルでこれらの好中球性炎症に対する効果を検討する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
耳鼻科医の異動もあって、今年度は、主要プロジェクトである①好酸球性炎症及び好中球性炎症がRV感染に与える影響(RV感染の重症化を規定する要因の解明)における、副鼻腔上皮細胞を入手することがほとんどできなかった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
①好酸球性炎症及び好中球性炎症がRV感染に与える影響(RV感染の重症化を規定する要因の解明)：ウィルスを精製したのち、副鼻腔炎の種類(好中球優位、好酸球優位)で、ウィルス複製能や炎症惹起能力などに差があるか検討する予定である。②CDHR3の好酸球機能に対する影響：好酸球機能に対する影響を検討する予定である。③抗コリン薬や糖尿病薬の好中球性気道炎症に対する効果：マウス好中球性気道炎症モデルでこれらの好中球性炎症に対する効果を検討する予定である。
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