| 研究課題/領域番号 |
15K09232
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
桑野 和善 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (40205266)
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| 研究分担者 |
荒屋 潤 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (90468679)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | エクソソーム / マイクロRNA / 細胞老化 / 気道上皮細胞 / 繊維芽細胞 |
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| 研究実績の概要 |
(1)気管支肺胞洗浄液より回収したエクソソーム中のmiRNA、蛋白質の網羅的解析：COPDやIPF患者のBALFから解析に十分なエクソソームを回収する。対象症例を増やす。回収したエクソソーム中のmiRNA microarray解析やプロテオーム解析を行い、COPDおよびIPFに特異的な、exosomal miRNAおよびタンパク質を同定する。COPDは検体の採取に問題はないが、IPFについては症例数が少ないため、近隣の病院にも協力していただき、倫理委員会への申請を行い、症例を集めている段階である。本実験は、荒屋が主導している。
(2)気道上皮由来エクソソームの線維芽細胞への取り込みの検討：気道上皮分泌エクソソームが線維芽細胞に取り込まれることによって細胞間情報伝達に関与しているか検討した。recipient cellとして線維芽細胞を用いた。BEAS-2Bおよびヒト由来初代気道上皮細胞(human bronchial epithelial cell: HBEC)の培養上清よりエクソソームを回収し、それぞれの細胞自身および線維芽細胞における取り込みを評価した。その結果、繊維芽細胞はエクソソームを取り込むことが確認できた。本実験は、大学院生である小林が行った。
(3)喫煙刺激による気道上皮由来エクソソームのパラクライン作用の検討：BEAS-2B、HBEC に対して1%タバコ煙水抽出液（cigarette smoke extract：CSE）による刺激を与え、エクソソーム分泌量の評価をNanoSightにて観察を行う。気道上皮細胞はCSE刺激により細胞老化を生じた。CSE刺激によるBEAS-2B由来exosomeを線維芽細胞に添加すると、線維芽細胞は金繊維芽細胞へ分化した。本実験は、大学院生である小林が行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定では、疾患肺の検体を用いた研究を進める予定であったが、検体が得られにくいIPFにつて今後の検体採取を計画通り行うため、他施設へも協力をお願いしたため、実際の検体の収集が遅れている。ただ、培養細胞を用いた研究に関しては予定よりも進みが早く順調である。
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| 今後の研究の推進方策 |
他施設での検体を得るための倫理委員会などの手続きが終了したため、IPFの手術検体が集積でき次第、解析を開始する。
in vitroの実験については順調に進行しており、現状のまま遂行できると考えている。
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