慢性腎臓病における創薬ターゲットとしての内因性リガンドMRP8の役割の検討

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K09268
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 桑原 孝成 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 講師 (00393356)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 慢性炎症 / 糸球体内クロストーク / 糸球体腎炎

研究実績の概要

前年度までの検討により、糸球体局所炎症に重要な役割を果たす炎症メディエーターMRP8がメサンギウム細胞-マクロファージのクロストークにより誘導され、メサンギウム細胞由来の液性因子のうち、そのうちの少なくとも一部はエクソソームがparacrineに関与している可能性が考えられた。また、糖尿病性腎症、半月体形成性腎炎などを含む糸球体疾患を有する患者尿を用いたこれまでの検討により、MRP8 monomerは血清中では検出されず、尿中特異的に排泄され、アルブミン尿とは異なる意義を有する可能性が示唆されていた。今年度は尿中MRP8 monomerの意義を明らかにするための検討を行った。当初、1D-PAGEでゲル抜きを行い、LC-MS/MSによる検出を試みたが、腎疾患患者では尿中に同程度の分子量物質が豊富に含まれていることなどから、濃縮不十分であり、ターゲットであるMRP8の検出に至らなかった。そこで尿蛋白を豊富に含む腎疾患患者尿で2D-PAGEを可能とする条件検討を行い、限外濾過法＋TCA沈殿の変法による濃縮法を確立した。本法で2D-PAGE後にMRP8のウエスタンブロットを行ったところ、major formであるMRP8/14は広いpIで複数のdotとして検出される一方、尿中のみで検出されるMRP8 monomerのpIは限局したspotとして捉えられた。このことから尿中には何らかの特異的修飾を受けたものが排泄されている可能性が想定された。尿中MRP8 monomer特異的に認められる修飾を同定、定量することで病態反映マーカーとしての応用が期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Sirtuin 7 Deficiency Ameliorates Cisplatin-induced Acute Kidney Injury Through Regulation of the Inflammatory Response (2018)
  • 著者名/発表者名: Miyasato Yoshikazu、Yoshizawa Tatsuya、Sato Yoshifumi、Nakagawa Terumasa、Miyasato Yuko、Kakizoe Yutaka、Kuwabara Takashige、Adachi Masataka、Ianni Alessandro、Braun Thomas、Komohara Yoshihiro、Mukoyama Masashi、Yamagata Kazuya
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 8 ページ: 5927
  • DOI: 10.1038/s41598-018-24257-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Obesity-promoting and anti-thermogenic effects of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in mice (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishii Akira、Katsuura Goro、Imamaki Hirotaka、Kimura Hiroyuki、Mori Keita P.、Kuwabara Takashige、Kasahara Masato、Yokoi Hideki、Ohinata Kousaku、Kawanishi Tomoko、Tsuchida Junichi、Nakamoto Yuji、Nakao Kazuwa、Yanagita Motoko、Mukoyama Masashi、Mori Kiyoshi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 ページ: 15501
  • DOI: 10.1038/s41598-017-15825-4
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A protease-activated receptor-1 antagonist protects against podocyte injury in a mouse model of nephropathy (2017)
  • 著者名/発表者名: Guan Yu、Nakano Daisuke、Zhang Yifan、Li Lei、Liu Wenhua、Nishida Motohiro、Kuwabara Takashige、Morishita Asahiro、Hitomi Hirofumi、Mori Kiyoshi、Mukoyama Masashi、Masaki Tsutomu、Hirano Katsuya、Nishiyama Akira
  • 雑誌名: Journal of Pharmacological Sciences 巻: 135 ページ: 81～88
  • DOI: 10.1016/j.jphs.2017.09.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] TSS-Seq analysis of low pH-induced gene expression in intercalated cells in the renal collecting duct (2017)
  • 著者名/発表者名: Izumi Yuichiro、Inoue Hideki、Nakayama Yushi、Eguchi Koji、Yasuoka Yukiko、Matsuo Naomi、Nonoguchi Hiroshi、Kakizoe Yutaka、Kuwabara Takashige、Mukoyama Masashi
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 12 ページ: e0184185
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0184185
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Natriuretic peptide receptor guanylyl cyclase-A pathway counteracts glomerular injury evoked by aldosterone through p38 mitogen-activated protein kinase inhibition (2017)
  • 著者名/発表者名: Kato Yukiko、Mori Kiyoshi、Kasahara Masato、Osaki Keisuke、Ishii Akira、Mori Keita P.、Toda Naohiro、Ohno Shoko、Kuwabara Takashige、Tokudome Takeshi、Kishimoto Ichiro、Saleem Moin A.、Matsusaka Taiji、Nakao Kazuwa、Mukoyama Masashi、Yanagita Motoko、Yokoi Hideki
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 ページ: 46624～46624
  • DOI: 10.1038/srep46624
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Local inflammatory mechanism aggravated by intraglomerular crosstalk in diabetic kidney (2017)
  • 著者名/発表者名: Shuro Umemoto, Takashige Kuwabara, Daisuke Fujimoto, Tomoko Kanki, Teruhiko Mizumoto, Yutaka Kakizoe, Yuichiro Izumi, Kiyoshi Mori, Masashi Mukoyama
  • 学会等名: Annual Meeting of the American Society of Nephrology
  • 国際学会
• [学会発表] Intraglomerular crosstalk in a mouse model of diabetic nephropathy aggravated by the renin-angiotensin system activation (2017)
  • 著者名/発表者名: Shuro Umemoto, Takashige Kuwabara, Daisuke Fujimoto, Tomoko Kanki, Teruhiko Mizumoto, Yuichiro Izumi, Yutaka Kakizoe, Hirotaka Imamaki, Kiyoshi Mori, Masashi Mukoyama
  • 学会等名: World Congress of Nephrology
  • 国際学会
• [図書] 腎疾患研究の最新の話題 (2017)
  • 著者名/発表者名: 桒原孝成、向山政志
  • 総ページ数: 2
  • 出版者: 北隆館
• [備考] 熊本大学腎臓内科HP
  • URL: www.kumadai-nephrology.com/