| 研究課題/領域番号 |
15K09277
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
宇都宮 一典 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (50185047)
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| 研究分担者 |
川浪 大治 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (50568889)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 糖尿病腎症 |
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| 研究実績の概要 |
Rho-kinase(ROCK)アイソフォームであるROCK2が糖尿病状態でポドサイトの機能に与える影響をNotchシグナルに着目をして検討した。in vitroの検討では、培養ポドサイトにおいてsiRNAを用いてROCK2をノックダウンすると、NotchシグナルのリガンドであるJag1の発現が抑制されることを確認した。次に、このNotchシグナルの抑制がポドサイトのアポトーシスに与える影響を検討した。TGF-betaの刺激によってポドサイトでの核濃縮、あるいはTUNEL陽性細胞の増加といったアポトーシスの誘導がみられたが、ROCK阻害薬によってこれらの変化は有意に抑制された。メカニズムについて検討を行ったところ、ROCK阻害薬によってERKやJNKといった細胞内シグナルのリン酸化が抑制され、その結果、Jag1の発現が減弱し、アポトーシスが抑えられることを確認した。それに引き続いてex vivoの検討を行った。糖尿病モデルであるdb/dbマウスからポドサイトの初代培養を行った。TGF-betaによる刺激を行ったところ、NotchシグナルのリガンドであるJag1の発現レベルがROCK阻害薬投与群で抑制されることを見出した。また、免疫染色においても糸球体におけるJag1の発現をROCK阻害薬が抑制することを確認した。これらの現象がin vitroでも再現出来るかを検討するため、ROCK2コンディショナルノックアウトマウスの作成を進めた。これまでのところ、キメラマウス、そしてflox/+のF1マウスを得ることに成功した。現在、Flp遺伝子除去に向けた作業を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
培養細胞を用いた実験は概ね順調に進んでいる。コンディショナルノックアウトマウスの作製についても進捗が得られているが、まだ完成には至っていないため。
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| 今後の研究の推進方策 |
ROCK2コンディショナルノックアウトマウスの完成を目指す。作製が完了次第、ポドサイトあるいは血管内皮特異的なROCK2ノックアウトマウスの樹立に向けた作業を進め、糖尿病モデルにおける、ポドサイトをはじめとする糸球体構成細胞に与える影響について検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験の進捗に若干の遅れが生じ、予定額を下回る使用にとどまったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度以降の実験に関わる費用に充てる。
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