| 研究課題/領域番号 |
15K09279
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
望月 俊雄 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (00277120)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 多発性嚢胞腎 / ADPKD / PKD1 / PKD2 / 遺伝子変異 / 次世代シークエンサー |
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| 研究実績の概要 |
ADPKDにおける早期診断ならびに除外診断ならびにADPKDの新たな治療薬であるバソプレシン受容体拮抗薬（トルバプタン）の適応決定のため、次世代シークエンスにより、迅速で、精度の高い、ADPKD遺伝子診断法を確立することが本研究の目的である。
今年度はまずこれまで遺伝子変異を検出できなかった患者23人について、検出感度の低い領域として特定されたPKD1のエクソン1、4、12、42、PKD2のエクソン1においてキャピラリー・シークエンス法を行った。しかしながら、現時点で新たな変異は特定できていない。
次世代シークエンスについては、PKD1ならびにPKD2遺伝子領域を含むゲノムの特定領域をターゲットDNA濃縮法（Sure Select）により選別した方法を用いていたが、当院での次世代シークエンサー解析装置の更新に伴い、PCRを用いた新たなIon-PGM法を採用することとした。具体的には、PKD1ならびにPKD2遺伝子領域のプライマー設定を行った。ただPKD1遺伝子領域ではエクソン１、4―7、11―12、14―15、17―19、21―26、29―30、42、45において、またPKD2遺伝子領域ではエクソン1においてはプライマー設定が困難であった。これらの領域に関しては、キャピラリー・シークエンス法を用いることなどを考慮している。
さらに新たな患者25人に同意を得て、DNAを採取した。これらも含めて遺伝子診断法の確立を目指す。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
次世代シークエンサーの技術革新により、当初計画していた「ターゲットDNA濃縮法」から「新たなIon-PGM法」を採用することにしたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
次世代シークエンスについて、PCRを用いた新たなIon-PGM法を採用するためのPKD1ならびにPKD2遺伝子領域のプライマーを設定し、シークエンスを行っていく。同時に、キャピラリー・シークエンスも行い、遺伝子変異検出率を高めていく。さらに新しい患者のＤＮＡの採取も行っていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次世代シークエンサーの技術革新により、当初計画していた「ターゲットDNA濃縮法」から「新たなIon-PGM法」を採用することにしたため、支出が次年度に移行したため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
「新たなIon-PGM法」の準備ならびに次世代シークエンス費用に充てる。
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