| 研究課題/領域番号 |
15K09291
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
安達 政隆 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (90398206)
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| 研究分担者 |
向山 政志 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (40270558)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 水・電解質学 / セリンプロテアーゼ |
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| 研究実績の概要 |
1) 腎臓におけるヘプシン発現の局在検討
4週齢雄ラット腎ネフロンをマイクロダイセクションした後、PT-PCR(タカラバイオPrimeScript;One Step RT-PCR Kit Ver.2)を施行したところ、腎近位尿細管から皮質集合尿細管においてラットヘプシンmRNAの発現を確認した。また、シスプラチン腎症モデルマウスの腎臓においてヘプシンmRNA発現の減少を認めたが、UUOモデルマウスの腎臓においてはヘプシンmRNA発現に変化は認めなかった。８週齢雄マウスの腎臓においてヘプシン抗体(Abcam ab27765)を用いたimmunohistochemistryを施行したが、ヘプシンを同定できず、現在、抗体をBioss社、とCayman Chemical社に変更して検討中である。
2) アフリカツメガエル卵母細胞系でのヘプシンによるNaPi-IIaリン輸送活性の測定
Ambion MEGAscriptを使用して作製したラットヘプシンおよびNaPi-Ⅱa cRNAをXenopus oocyteに共発現させ、還流液のNA96に3mMPiとなるようPiを添加し、Na依存性の電流を測定した後、NaClをコリンクロライドに置換することによりIp を測定した。コントロールと比較し、ヘプシンとNaPi-IIa を共発現させてもIpに変化はなかった。
3) ヘプシン(TMPRSS1) flox マウス(loxP-flanked alleleを持つ)の作製と全尿細管ヘプシンノックアウトマウスの作製の前に慢性Pi負荷時および急性Pi負荷時の腎臓および尿細管におけるヘプシンおよびNaPi-Ⅱaの発現について、現在、モデルマウスを作製し、検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
地震による機器の故障、廃棄のため、実験・測定系の確立ができず、遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の実験計画で予定していた機器を使用せず、別の機器での実験を検討中である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
熊本地震による実験室と実験機器の損壊等の影響で実験を長期間遂行することができず、予定通りの実験が進まなかったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
昨年度、遂行することができなかった実験を本年度に実施予定である。
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