研究課題
近年多くの大規模臨床研究の結果から、心血管リスクにミネラルコルチコイド受容体（MR）の活性化の関与が示唆されているが、MR のエピゲノムを介した標的遺伝子転写活性化の分子メカニズムやヒストン修飾とDNA 脱メチル化のクロストークは未だ不明な点が多い。我々はFLAG-MRを用いた新規MR相互作用因子スクリーニングの結果得られた因子のうち、脱メチル化酵素であるten-eleven translocation 2(TET2)に注目し、MR転写に与える影響の解析を行うことでMRによるエピゲノム制御機構を明らかにすることとした。TET2のMR転写活性に与える影響を調べるために、MR stable HEK293細胞においてTET2のknock downを行い、アルドステロン処置によるMR標的遺伝子のSGK1とENaCのmRNA発現をリアルタイムPCRで評価したところ、いずれの標的遺伝子もmRNAレベルでの低下が認められ、TET2はMRの転写活性を促進する転写促進因子であることが示唆された。TET2をMRと共にHEK293細胞に強発現させ、共免疫沈降法により細胞内の相互作用を検討したが、有意な結合が認められず、条件を変更しても結合の確認はできなかった。そのためMR相互作用因子スクリーニングで発見されたTET2以外の因子のうち、脱メチル化酵素であるKDM4BおよびUTX,ヒストンメチル化酵素であるEHMT1およびEHMT2, ヒストンアセチル化酵素であるMYSTについての解析を行った。UTXのノックダウンでSGK1のmRNAレベルでの上昇を認め、UTXが転写抑制因子である可能性が示唆された。EHMT2およびHDAC2のノックダウンではSGK1のmRNAレベルの低下を認め、これらの因子が転写促進因子である可能性が示唆された。KDM4B、EHMT1のノックダウンでは変化が明らかでなかった。
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Molecular and Cellular Endocrinology
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10.1016/j.mce.2018.01.007
