TTRの断片化を活用したFAP病態解明へのブレイクスルーと新規疾患モデル構築

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K09318
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 植田 光晴 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (60452885)
• 研究分担者: 水口 峰之 富山大学, 大学院医学薬学研究部(薬学), 教授 (30332662) ; 山中 邦俊 熊本大学, 発生医学研究所, 准教授 (90212290)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: アミロイドーシス / トランスサイレチン

研究実績の概要

アミロイド原性の高いTTRのC末端側フラグメントペプチドを用いて、細胞培養モデルを構築した。本細胞培養モデルを用いて、TTRアミロイドーシスの病態解析を行った。複数の細胞株に対して細胞毒性を示すことが確認された。RNA-seqを用いた網羅的発現解析で、アポトーシスに関連する分子や、炎症、細胞接着に関連する分子の発現誘導が確認された。また、細胞培養モデルを用いて、抗アミロイド作用を持つ化合物のスクリーニングを行った。1次スクリーニングで約1200化合物から75化合物を抽出し、2次スクリーニングで20化合物を抽出した。これらの候補化合物を用いて、試験管内のアミロイド形成抑制作用とすでに形成されたアミロイド線維の分解作用を検証している。またこれらの化合物の中には、TTR安定化作用も合わせて有するものが存在することも明らかとなった。今後はin vivoモデルを用いて、抗アミロイド効果を検討する。
新規のin vivoモデルであるTTR発現線虫を作成している。特にTTRのC末端側を発現する線虫に運動機能の低下や、凝集物の形成、寿命の短縮などの表現型が認められた。
TTRのC末端側に特異的に反応する抗体を作成し、アミロイドの形成を抑制するか検討した。いくつかのTTR抗体はアミロイド化したTTRに特異的に反応し、in vitroの検討でアミロイド形成を抑制することが判明した。今後、in vivoモデルを用いたアミロイド抑制効果を検証する予定である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

化合物スクリーニング、in vivoモデルの作成は順調に進展している。

今後の研究の推進方策

抽出した化合物のアミロイド抑制効果をさらに詳細に検証すると共に、in vivo モデルの作成とin vivoモデルを用いた化合物の作用を検証する。

次年度使用額が生じた理由

薬剤スクリーニング研究の進展に関連して、本年度の研究遂行には予定より少額の使用となった。次年度以降に予定分を使用し研究を遂行する。

次年度使用額の使用計画

細胞培養モデルを用いた抗アミロイド薬スクリーニング、線虫モデルの構築に用いる。

研究成果

• [雑誌論文] Clinicopathological and biochemical findings of thyroid amyloid in hereditary transthyretin amyloidosis with and without liver transplantation. (2017)
  • 著者名/発表者名: Huang G, Ueda M, Tasaki M, Yamashita T, Misumi Y, Masuda T, Suenaga G, Inoue Y, Kinoshita Y, Matsumoto S, Mizukami M, Tsuda Y, Nomura T, Obayashi K, Ando Y.
  • 雑誌名: Amyloid ページ: e-pub
  • DOI: 10.1080/13506129.2016.1276440
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effects of tafamidis treatment on transthyretin (TTR) stabilization, efficacy, and safety in Japanese patients with familial amyloid polyneuropathy (TTR-FAP) with Val30Met and non-Val30Met: A phase III, open-label study. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ando Y, Sekijima Y, Obayashi K, Yamashita T, Ueda M, Misumi Y, Morita H, Machii K, Ohta M, Takata A, Ikeda S.
  • 雑誌名: J Neurol Sci. 巻: 362 ページ: 266-271
  • DOI: 10.1016/j.jns.2016.01.046
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recipient aging accelerates acquired transthyretin amyloidosis after domino liver transplantation. (2016)
  • 著者名/発表者名: Misumi Y, Narita Y, Oshima T, Ueda M, Yamashita T, Tasaki M, Obayashi K, Isono K, Inomata Y, Ando Y.
  • 雑誌名: Liver Transpl 巻: 22 ページ: 656-664
  • DOI: 10.1002/lt.24371
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of macrophages in the pathogenesis of familial amyloid polyneuropathy and efficacy of human iPS cell-derived macrophages in its treatment. (2016)
  • 著者名/発表者名: Suenaga G, Ikeda T, Komohara Y, Takamatsu K, Kakuma T, Tasaki T, Misumi Y, Ueda M, Ito T, Senju S, Ando Y.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 11 ページ: e0163944
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0163944
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Novel antibody for the treatment of transthyretin amyloidosis. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hosoi A, Su Y, Torikai M, Jono H, Ishikawa D, Soejima K, Higuchi H, Guo J, Ueda M, Suenaga G, Motokawa H, Ikeda T, Senju S, Nakashima T, Ando Y.
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 291 ページ: 25096-25105
  • DOI: 10.1074/jbc.M116.738138
  • 査読あり
• [学会発表] TTRアミロイドーシスの治療法開発． (2016)
  • 著者名/発表者名: 植田光晴、安東由喜雄
  • 学会等名: 第４回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2016-08-19 – 2016-08-19
  • 招待講演
• [学会発表] アミロイドアンギオパチーの病態と治療の展望． (2016)
  • 著者名/発表者名: 植田光晴、井上泰輝、山下太郎、安東由喜雄
  • 学会等名: 第59回日本腎臓学会学術集会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2016-07-17 – 2016-07-19
  • 招待講演
• [学会発表] Role of C-terminal portion of transthyretin on amyloid formation. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ueda M, Mizuguchi M, Misumi Y, Tasaki M, Suenaga G, Matsumoto S, Mizukami M, Masuda T, Yamashita T, Kluve-Beckerman B, Liepnieks JJ, Benson MD, Ando Y.
  • 学会等名: The XVth International Symposium on Amyloidosis.
  • 発表場所: Uppsala, Sweden
  • 年月日: 2016-07-03 – 2016-07-07
  • 国際学会
• [学会発表] Amyloid formation of C-terminal portion of transthyretin. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ueda M, Mizuguchi M, Misumi Y, Masuda T, Tasaki M, Suenaga G, Inoue Y, Tsuda Y, Nomura T, Kinoshita Y, Matsumoto S, Mizukami M, Yamashita T, Ando Y.
  • 学会等名: 第57回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2016-05-18 – 2016-05-21