| 研究課題/領域番号 |
15K09319
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
笠井 高士 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (70516062)
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| 研究分担者 |
水野 敏樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30264782)
大島 洋一 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (50516060) [辞退]
徳田 隆彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80242692)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | パーキンソン病 / αsynuclein / 脂質 / リポ蛋白 |
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| 研究実績の概要 |
Parkison病(PD)において細胞外に分泌されるα-syuclein(αsyn)はPD病理の進展過程を仲介する存在であり、そのクリアランスの促進はPDの根本治療に新しいアプローチとなり得る。申請者は新たな存在様式として脂質代謝系、特にリポ蛋白と共益した代謝経路の存在を仮定し、同経路を通して中枢神経由来αsynuは体循環系、すなわち血漿中へ自由に排出されるという新しい仮説を提唱し、その存在を検証するために本研究を企画した。
申請者らはゲル濾過法によって分子サイズに応じてふるい分けしたVLDL,LDL,HDL画分にαsynが存在していることをαsyn特異的抗体を使ったWestern blot法によって示した。また超遠心法によって分取した脂質画分においても同様にαsynの存在を確認した。さらにより簡便に脂質結合型αsynを抽出・検証する手法として、脂質分子を血漿から吸着する特殊カラムを用いて血漿から脂質を分離し、脂質成分からαsynを検証する方法を開発した。この手法を応用することによって同画分から安定的に脂質関連αsynを分取することが可能になった。こうした研究を通して脂質分子関連α-synは主としてHDL領域に多く存在しており、Western blotでもApoA1 ApoE ApoJなどが検出される領域に認められることを明らかにした。
さらにこうした脂質関連αsynは既存ELISAでは殆ど検出されないことを明らかにした。おそらくELISA法での検出の困難さはepitopeの脂質分子中への埋没によると想定された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2017年度に予定していたαsynucleinの存在様式の同定は予定通り進捗している、既存のELISA法で検出できない可能性についても当初予想されていたことではあったが、同問題を克服する目的で質量分析法を応用して仮説検証の補完を試みたが、現時点では血漿中の干渉蛋白の存在のため難航している。
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| 今後の研究の推進方策 |
2017年度には実施できなかった、αsynucleinの脂質中共局仮説を質量分析法を用いて検証する。従来法では蛋白相互作用による干渉によって適切な確認ができなかったので本年度は免疫沈降法を用いて検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本研究の最終確認として質量分析によるαsyn同定プロセスが残っている。同研究については委託しており、その委託研究費および委託施設での打ち合わせ目的の出張旅費として助成金残金は使用される予定。
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