| 研究実績の概要 |
以前に実施した正常下垂体および下垂体腺腫におけるmiRNAマイクロアレイ解析の生データを再解析した。シグナル強度が100以上で,正常下垂体に比べ2倍以上のシグナルの差異があるものを選んだ。ACTH・FSH/LH・ナルセル腺腫いずれにおいても低下していた24種のmiRNAのうち23種が14p32インプリンティング領域に位置するmiRNAであった。一方、14p3領域の33種のmiRNAがGH腺腫で発現増加が認められた。qRT-PCRで確認したところmiR-127-3p, MiR-495, miR-487b, miR-154では正常下垂体に比してGH腺腫で有意な発現増加を、FSH/LH腺腫では発現低下を認めた。
そこで、14p32インプリンティング領域の発現を調節しているIG-DMRのCG4領域の4ヵ所のCpGおよびMEG3-DMR内の8ヵ所のCpGのメチル化状態をパイロシークエンシング法にて解析した。
2種の正常下垂体においてはIG-DMRおよびMEG3-DMRの12箇所のメチル化は40-70％であった。2種のGH腺腫においては40-100％で、発現上昇から期待した低メチル化は認めなかった。MS-MLPA法でのMEG3の低メチル化を認めた1種では特定のCpGの低メチル化を認めたため、バイサルファイトシークエンシング法で確認した。その結果、同部位に非メチル化を認めたが、全体的（8ヵ所）には66％のメチル化であった。1種のFSH/LH腺腫ではIG-DMRで30-50%, MEG3-DMRで40-70%と低発現を説明しうる高メチル化は認めなかった。一方、正常下垂体のMEG3-DMRサルファイトシークエンシング法では75％のクローンのすべてのCpG部位にメチル化を認めたことから、成人下垂体において14q32のインプリント機構は保持されていることが強く示唆された。
|
