正常・異常造血におけるDNAメチル化制御分子を介した未分化性維持の新規分子機構

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K09452
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 小埜 良一 三重大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (40422414)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 白血病

研究実績の概要

平成２７年度は、既に樹立していた申請者の注目するDNAメチル化制御遺伝子のflox/floxマウスを、条件的遺伝子欠損を可能にする誘導型Cre発現マウスとの交配を進め、得られた条件的遺伝子欠損マウスを用いて、実際に遺伝子欠損を誘導し、造血能の評価を行った。まず、遺伝子欠損誘導後一ヶ月で遺伝子欠損が生じていることを、造血系の細胞から抽出したＤＮＡで確認し、抽出ＲＮＡを用いて発現が消失していることも確認した。また、骨髄細胞を採取し、造血幹・前駆細胞における表現型を多角的に解析し、造血幹細胞の骨髄移植実験も行って、検討を進めた。その結果、幾つかの分化系統における影響や、自己複製能と関連する表現型が認められ、現在、二次的な骨髄移植実験等の詳細な解析を進めている。
一方、異常造血に関しても、上記条件的遺伝子欠損マウスを、誘導的白血病発症マウスと交配させた、新たなマウスモデルを作成した。実際に、白血病発症を誘導する際における、遺伝子欠損の影響を検討したところ、大部分のマウスにおいて、興味深い表現型の変化が出現した。一部、変化の乏しいマウスもいるため、現在、対象マウスの数を増やして、検討を進めている。また、このマウスモデルを用いた実験と平行して、骨髄細胞を採取し、レトロウイルスによる遺伝子導入を用いて白血病発症を誘導する前後における、遺伝子欠損の影響に関しても、in vitroのコロニーアッセイによる不死化実験で検討し、現時点では、マウスモデルの結果と矛盾しないデータを得ている。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

平成２7年度は、当初の計画通り、各種モデルマウスの構築、実際にマウスを用いた実験など、ほぼ順調に進行し、予定された解析も行えていることから、研究実施計画に照らし合わせ、おおむね順調に進展していると考えられる。

今後の研究の推進方策

引き続き、当初の平成28年度研究実施計画にあるように、樹立した各種モデルマウスを用いて、個体レベルにおける正常、および異常造血に対するDNAメチル化制御分子の果たす役割の解析を詳細に進めていく。

研究成果

• [雑誌論文] Novel working hypothesis for pathogenesis of hematological malignancies: combination of mutations-induced cellular phenotypes determines the disease (cMIP-DD). (2016)
  • 著者名/発表者名: Kitamura T, Watanabe-Okochi N, Enomoto Y, Nakahara F, Oki T, Komeno Y, Kato N, Doki N, Uchida T, Kagiyama Y, Togami K, Kawabata KC, Nishimura K, Hayashi Y, Nagase R, Saika M, Fukushima T, Asada S, Fujino T, Izawa Y, Horikawa S, Fukuyama T, Tanaka Y, Ono R, Goyama S, Nosaka T, Kitaura J, Inoue D
  • 雑誌名: Journal of Biochemistry 巻: 159 ページ: 17, 25
  • DOI: 10.1093/jb/mvv114
  • 査読あり
• [学会発表] びまん性大細胞型B細胞リンパ腫細胞におけるSH3BP5, LMO3, SNAP25発現と臨床病態との関連 (2015)
  • 著者名/発表者名: 小林 恭子, 山口 素子, 宮崎 香奈, 今井 裕, 小埜 良一, 野阪 哲哉, 片山 直之
  • 学会等名: 第74回日本癌学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場(名古屋)
  • 年月日: 2015-10-10 – 2015-10-10
• [備考] 三重大学大学院医学系研究科 感染症制御医学・分子遺伝学
  • URL: http://www.medic.mie-u.ac.jp/microbiol/index.html