悪性リンパ腫の経時的遺伝子変異解析による治療抵抗機序の同定と臨床試験への応用

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K09473
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 冨田 章裕 藤田保健衛生大学, 医学部, 准教授 (80378215)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: リキッドバイオプシー / 悪性リンパ腫 / 血管内大細胞型B細胞リンパ腫 / 網羅的遺伝子変異解析 / 免疫回避

研究実績の概要

びまん性大細胞型B細胞性リンパ腫（DLBCL）の亜型である血管内大細胞型B細胞リンパ腫（IVLBCL）より採取された腫瘍細胞および末梢血無細胞遊離DNA（cfDNA）を用いて、全エクソン解析（WES）を行い、検出された遺伝子変異のvalidationをSanger sequence法により行った。初発IVLBCL (N=21)より得られたcfDNAは、全症例においてWESで解析可能であった。IVLBCLにおけるcfDNA濃度の経時的解析(N=6)では、cfDNA濃度は血清LDH値に相関し、治療効果を反映して経過にともない著明に減少することを確認した。WESにおいては、NFκB経路関連因子における変異が蓄積することが確認され、特にMYD88, CD79B変異の重複が特徴的であった。また、PIM1, IGLL5のsomatic hypermutation、CDKN2A欠失、エピゲノム・転写調節関連因子の変異に加え、免疫回避に関連する因子における変異が蓄積することが確認された。また、免疫回避関連因子の遺伝子座における構造異常（SV）についても検出された。特定の免疫回避関連因子に対する3種類の抗体を用いた免疫組織染色では、異常に見合うパターンでの蛋白発現が確認され、実際の症例において免疫回避関連因子変異やSVが、蛋白発現異常に強く関与していることが示唆された。これらの解析から、IVLBCLにおける遺伝子変異解析にcfDNAは極めて有用であり、また検出される遺伝子変異のパターンを解析することは、臨床現場においてしばしば困難とされるIVLBCLの診断を、より鋭敏で確実にできる方法となり得ることが推測された。この知見をもとに、IVLBCLを疑う症例におけるcfDNAを用いた遺伝子解析の有用性の検討を目的として、前向き臨床試験の実施を計画している。

研究成果

• [雑誌論文] Partial restoration of CD20 protein expression and rituximab sensitivity after treatment with azacitidine in CD20-negative transformed diffuse large B cell lymphoma after using rituximab. (2018)
  • 著者名/発表者名: Hiraga J, Tomita A, Suzuki N, Takagi Y, Narita M, Kagami Y.
  • 雑誌名: Ann Hematol. 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1007/s00277-018-3354-1.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intratumoral evaluation of 3D microvasculature and nanoparticle distribution using a gadolinium-dendron modified nano-liposomal contrast agent with magnetic resonance micro-imaging. (2018)
  • 著者名/発表者名: Nitta N, Takakusagi Y, Kokuryo D, Shibata S, Tomita A, Higashi T, Aoki I, Harada M.
  • 雑誌名: Nanomedicine. 巻: 14(4) ページ: 1315-1324
  • DOI: 10.1016/j.nano.2018.03.006.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] earrangement of VPS13B, a causative gene of Cohen syndrome, in a case of RUNX1-RUNX1T1 leukemia with t(8;12;21). (2017)
  • 著者名/発表者名: Abe A, Yamamoto Y, Katsumi A, Okamoto A, Tokuda M, Inaguma Y, Yamamoto K, Yanada M, Kanie T, Tomita A, Akatsuka Y, Okamoto M, Kameyama T, Mayeda A, Emi N.
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1007/s12185-017-2387-x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Altered EZH2 splicing and expression is associated with impaired histone H3 lysine 27 tri-Methylation in myelodysplastic syndrome. (2017)
  • 著者名/発表者名: Shirahata-Adachi M, Iriyama C, Tomita A, Suzuki Y, Shimada K, Kiyoi H.
  • 雑誌名: Leuk Res. 巻: 63 ページ: 90-97
  • DOI: 10.1016/j.leukres.2017.10.015.
• [雑誌論文] A nationwide survey of hypoplastic myelodysplastic syndrome (a multicenter retrospective study). (2017)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Nannya Y, Ichikawa M, Oritani K, Kanakura Y, Tomita A, et. al.
  • 雑誌名: Am J Hematol. 巻: 92(12) ページ: 1324-1332
  • DOI: 10.1002/ajh.24905.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phase II Study of the Efficacy and Safety of Pembrolizumab for Relapsed/Refractory Classic Hodgkin Lymphoma. (2017)
  • 著者名/発表者名: Chen R, Zinzani PL, Fanale MA, Armand P, Johnson NA, Brice P, Radford J, Ribrag V, Molin D, Vassilakopoulos TP, Tomita A, von Tresckow B, Shipp MA, Zhang Y, Ricart AD, Balakumaran A, Moskowitz CH; KEYNOTE-087.
  • 雑誌名: J Clin Oncol. 巻: 92(12) ページ: 1324-1332
  • DOI: 10.1200/JCO.2016.72.1316.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Emetine elicits apoptosis of intractable B-cell lymphoma cells with MYC rearrangement through inhibition of glycolytic metabolism. (2017)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Shimada K, Sakamoto A, Sugimoto K, Morishita T, Kojima Y, Shimada S, Kato S, Iriyama C, Kuno S, Harada Y, Tomita A, Hayakawa F, Kiyoi H.
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 8(8) ページ: 13085-13098
  • DOI: 10.18632/oncotarget.14393.
  • 査読あり
• [学会発表] Detection of Recurrent Genetic Mutations in Intravascular Large B-Cell Lymphoma By Comprehensive Genetic Analyses Using Peripheral Blood Circulating Cell-Free DNA. (2017)
  • 著者名/発表者名: Akihiro Tomita, Kazuyuki Shimada, Kenichi Yoshida, Yasuhiro Suzuki, Chisako Iriyama, Masashi Sanada, Masaaki Yuge, Yusuke Takagi, Shigeru Kusumoto, Yasufumi Masaki, Takahiko Ito, Yuichiro Inagaki, Akinao Okamoto, Yuichi Shiraishi, Kenichi Chiba, Hiroko Tanaka, Satoru Miyano, Seishi Ogawa and Hitoshi Kiyoi.
  • 学会等名: 59th Annual meeting od American Society of Hematology
  • 国際学会
• [学会発表] 成人リンパ腫領域におけるデータストレージ構築とクリニカルシークエンス. (2017)
  • 著者名/発表者名: 冨田章裕
  • 学会等名: 国立がん研究センターがん研究開発費 29-A-3「成人固形がんに対する標準治療確立のための基盤研究」班(大江班)、「難治性リンパ腫小班」(山口小班) 班会議
• [学会発表] Peripheral blood circulating cell-free DNA (PBcfDNA) - an alternative tumor DNA source in malignant lymphoma -. (2017)
  • 著者名/発表者名: Akihiro Tomita
  • 学会等名: 第57回日本リンパ網内系学会総会
  • 招待講演
• [学会発表] リンパ腫の臨床現場で遺伝子変異解析を行うことの意義 (2017)
  • 著者名/発表者名: 冨田章裕
  • 学会等名: 第 3 回リンパ腫分子病態研究会
  • 招待講演
• [学会発表] 再発又は難治性古典的ホジキンリンパ腫患者を 対象とした MK-3475 の第 2 相試験 (2017)
  • 著者名/発表者名: Akihiro Tomita、et. al.
  • 学会等名: 第 79 回日本血液学会学術集会