研究課題
本研究は、ヒトCD34陽性造血幹・前駆細胞を用いた、ゲノム編集による造血器腫瘍発症モデルを確立することを目的とし、遺伝子変異／遺伝子欠損の造血器腫瘍への関与を、ヒト造血細胞を用いてより直接的に解明することを目指したものである。これまで、造血器悪性腫瘍の解析には、白血病細胞株や初代培養造血細胞、およびマウス(遺伝子改変マウス・骨髄移植モデル)が有用なツールとして汎用されてきた。しかしながら、細胞への変異遺伝子導入やマウス骨髄移植は、多くの場合、内在的な発現レベルを大きく超えた過剰発現系での解析となってしまうという問題点がある。また、腫瘍抑制因子の欠損を再現する場合には、shRNAなどを用いた発現抑制法が頻用されるが、この場合も必ずしも発現レベルの調節が容易ではない。ノックアウトマウスモデルはこれを回避できる優れた実験系と言えるが、多くの専門的技術を要し、時間的・金銭的コストも無視できない。こうしたことを背景に、本研究では正常ヒト造血幹・前駆細胞でのゲノム編集手法の確立を進めてきた。まず最適なベクターの構築を図るため、白血病細胞株を用いた基礎検討を行った。当初は、これまでに十分な経験を有するレトロウイルス系を用いることを想定してきたが、初代培養細胞への導入のため、並行してレンチウイルスベクターを用いた方法も検討し、後者によるCas9発現が安定的であることを確認した。一方、ゲノム編集の対象とする遺伝子は、最近造血器腫瘍で体細胞遺伝子変異と生殖細胞系列変異の両方が発見された、DDX41遺伝子を主なターゲットに据えてきた。本遺伝子の場合、生殖細胞系列変異としては主にフレームシフトが起こり、機能喪失型の変異に至ると想定される。一方、体細胞遺伝子変異はほぼp.R525Hに集中していることから、機能獲得型変異である。H30年度以降は、DDX41にフォーカスした研究費申請のもと解析を続ける。
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すべて 雑誌論文 (15件) (うち国際共著 1件、 査読あり 10件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (12件) (うち招待講演 2件)
Leuk Res.
巻: in press ページ: in press
-
Leukemia.
J Pathol.
巻: 244(3) ページ: 367-379
10.1002/path.5019
J Neurol.
巻: 265(1) ページ: 134-140
10.1007/s00415-017-8640-7
臨床病理
巻: 66(3) ページ: 281-287
Int J Hematol.
巻: 106(2) ページ: 160-162
10.1007/s12185-017-2284-3
Thromb. J.
巻: 15(8) ページ: -
10.1186/s12959-017-0132-6
Sci. Rep.
巻: 7(1) ページ: 1579
10.1038/s41598-017-01775-4
J. Clin. Invest.
巻: 127(5) ページ: 1918-1931
10.1172/JCI91406
巻: 31(11) ページ: 2303-2314
10.1038/leu.2017.59
巻: 31(4) ページ: 861-871
10.1038/leu.2016.268
日本血栓止血学会誌
巻: 28(6) ページ: 683-691
検査と技術
巻: 45(11) ページ: 1206-1212
日本臨床検査自動化学会会誌
巻: 42(2) ページ: 123-134
Medical Technology
巻: 45(5) ページ: 438-439
