2016 年度実施状況報告書

先天的p53機能亢進型変異による新たな疾患モデルの確立

研究課題

研究課題/領域番号	15K09644
研究機関	山梨大学
研究代表者	中根貴弥山梨大学, 総合研究部, 准教授 (90422683)
研究期間 (年度)	2015-04-01 – 2018-03-31
キーワード	p53
研究実績の概要	マウス：遺伝子編集技術により、昨年度作成に成功したp53活性化マウス（c.1075_1076insC, p.Ser359GlnfsX20）の表現型の解析を行った。p53活性化マウス（ヘテロ体）では、末梢血で、白血球数が約50%に低下し、赤血球数も20-30%の低下がみられると同時に、MCV (平均赤血球容積)が10-20%増加し、大球性貧血のパターンを示した。Poly(I:C)の腹腔内投与を行うと、p53活性化マウスでは野生型と比べて、白血球数、赤血球数の低下が顕著であり、MCVもさらに増大した。血小板数は野生型では増加したのに対し、p53活性化マウスでは有意に低下した。MlethoCultを用いてマウス造血幹細胞のコロニーアッセイをおこなったところ、p53活性化マウスでは野生型と比較して、有意にCFU-E、BFU-Eの両者が著しく低下しており、造血幹細胞機能に異常が生じていることがあきらかになった。p53活性化マウスに、さらにXpd遺伝子変異を導入したダブルヘテロマウスも作成しているが、現時点ではXpd変異導入による相乗作用は観察されていない。ゼブラフィッシュ：Xpd遺伝子改変ゼブラフィッシュ（c.510delTinsGGTAA, p.Pro171ValfsX16）のホモ体は受精後72時間の時点で小眼球症・小脳症を認めることを昨年度発見したが、組織学的検査とin situ hybridizationを行い、硝子体の発生過程に異常が生じていることを明らかにした。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由作成した遺伝子編集動物の表現型解析で、極めて特異的な所見の同定に成功し、そのメカニズムの解明も次第にわかってきている。
今後の研究の推進方策	p53活性化マウスの骨髄形成不全のメカニズムをさらに明らかにする。具体的には、マウス胎児由来線維芽細胞（Mouse embryonic fibroblast）を作成し、紫外線・放射線照射下において、アポトーシス・細胞周期をp53活性化マウスと野生型で比較する（関連遺伝子のリアルタイムPCRによる発現解析、PI staining、γH2AXの発現、フローサイトメトリーによる細胞周期の解析等）。さらに、マウスで見つかった変化が、ヒトのp53活性化変異を有する患者でも同様にみられるかを、患者から既に得ている線維芽細胞を用いて確認する。