| 研究課題/領域番号 |
15K09783
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
谷口 智憲 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (40424163)
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| 研究分担者 |
河上 裕 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50161287)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 悪性黒色腫 / がん免疫療法 |
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| 研究実績の概要 |
悪性黒色腫は、免疫療法が奏効しやすく、最近では、抗CTLA-4 抗体、抗PD-1 抗体や、養子免疫療法の開発により、長期生存が得られる標準治療法の一つとして認められつつある。しかし、治療不応例もまだ多数存在し、さらなる改善のために、効く症例を見分けられるマーカー、及び治療不応の分子機序の解明と克服法の開発が課題である。本研究では、悪性黒色腫において、がん組織の中でも、不均一(heterogeneity)に発現する細胞表面分子マーカーの中から、免疫抑制を誘導して免疫療法耐性となる細胞分画を定義できるマーカーの同定を試みた。これまでヒト悪性黒色腫組織で発現が報告されている表面抗原18種類に関して、9種類のヒト悪性黒色腫細胞株で、発現様式をFACSで解析した。その結果、5つ以上細胞株で、その発現様式に不均一性を示した表面抗原を5つ同定した。そのうちの抗原A, B, Cに関して、その陽性分画と陰性分画を各々分離し、悪性黒色腫の腫瘍抗原であるMART-1に特異的なT細胞に対する感受性を、IFN-γ放出試験で評価した。その結果、抗原A, Bに関しては、その陰性分画は、陽性分画に比べて、MART-1特異的T細胞に対して耐性であること、抗原Cに関しては、その陽性分画は、陰性分画に比べて、MART-1特異的T細胞に対して耐性であることがわかった。さらに、cancer genome atlas (TCGA) データベースにおいて、325悪性黒色腫症例で、抗原Aの発現強度を解析すると、CD8、Perforin、PD-1の発現強度と相関を認めた。以上より抗原A, B, Cの発現は、ヒト悪性黒色腫において、抗腫瘍免疫応答の誘導に関与している可能性、そのマーカーとなる可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究の平成２７年度の計画は、以下の３つであった。① 悪性黒色腫で不均一(heterogeneity)に発現する表面マーカーを探索する。② 悪性黒色腫において、免疫抑制能の高い細胞分画を定義できるマーカーを、①で同定された候補の中から探索する。③ ②で同定されたマーカーの発現と臨床病理学的因子との相関を、ヒト悪性黒色腫の臨床検体を用いて解析する。これらの計画に関しての本年度の進捗具合を以下に記す、①に関しては、9種類のヒト悪性黒色腫細胞株を用いて、１８種類の表面抗原の発現を解析した結果、5つ以上細胞株で、その発現様式に不均一性を示す表面抗原を5つ同定することができた。②に関しては、①で同定した5つのうち３つ(抗原A, B, C)に関して、陽性分画と陰性分画に、抗腫瘍T細胞に対する感受性を評価したところ、どの抗原に関しても、感受性の差が認めることを明らかにできた。③に関しては、抗原Aに関して、ヒト悪性黒色腫組織中の発現がT細胞関連の遺伝子の発現と相関していることを、TCGAデータベースの解析より明らかにした。②に関しては、より多くの細胞株での検証で一般性を確認する必要があり、③に関しては、我々の保有する組織でより詳細な解析が必要であるが、現時点では当初の目的に向けて、研究は順調に進捗しており、ほぼ満足できる達成度であると考えている。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度に同定した5つのマーカーのうち3つは腫瘍抗原特異的T細胞への感受性を評価したが、残り2つについても今後評価する。さらにこれら5つのマーカーの組み合わせによって、より耐性の分画を定義できるかを検討する。また、T細胞への感受性の違い以外にも、樹状細胞(DC)に対する抑制能、免疫抑制性のM2マクロファージ、制御性T細胞の誘導能の違いなどを評価する。また、これらの感受性、抑制能の違いについて、より多くの悪性黒色腫細胞株で検討し、一般性を確認する。つぎに、これらのマーカーの発現と、臨床病理学的因子との相関をヒト悪性黒色腫の臨床検体を用いて検討する。その際、予後や転移などの一般的な因子に加えて、がん組織に浸潤している免疫細胞(CD8＋T細胞、制御性T細胞、DC、MDSC(Myeloid-derived suppressor cell)など)も免疫染色で解析し、その浸潤数とマーカー発現の相関を解析する。次にこれらのマーカーで定義されるがん細胞集団の性質を、DNAマイクロアレイなどの網羅的解析法を用いて明らかにする。この解析の結果、免疫抵抗性分画に対する治療標的が、同定出来たならば、それに対する分子標的薬、もしくはRNAiなどを用いて、免疫療法の効果を改善できるかをマウス治療モデルを用いて検討する。
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