食道癌におけるプロモーター領域のメチル化とmicroRNA発現の網羅的解析

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K10104
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 齋藤 誠哉 熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (00594475)
• 研究分担者: 坂本 快郎 熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (00452897) ; 宮本 裕士 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (80551259) ; 林 洋光 熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (80625773)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: エピジェネティクス / miRNA / メチル化 / 食道扁平上皮癌

研究実績の概要

食道扁平上皮癌の細胞株であるTE-1とKYSE30に5AZA処理することでDNAのメチル化レベルが低下する。5AZA処理前後のRNAを用いてmiRNAのarray解析を行い、メチル化により発現が変化するmiRNAの同定を行った。miR-145のプロモーター領域のメチル化レベルが低下し、その発現レベルが上昇することから、miR-145はプロモーター領域により発現が制御されていることを以前に報告している。食道扁平上皮癌の診断で根治的手術が施行された88例のホルマリン固定パラフィン包埋組織からマクロダイセクション法により癌組織を採取し、miRNeasy FFPE Kit（QIAGEN）を用いてmiRを含むTotal RNAを抽出し、miRNAの発現レベルはqRT-PCR（Quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction）法を用いて測定した。しかし、miR-145の発現レベルと臨床病理学的因子、予後と有意な関係性が認められず、miR-145の機能解析の為の基礎実験には進めることができなかった。次に、miR-146aの発現レベルも測定したが臨床病理学的因子との有意な関係は認めなかった。Arrayにて発現に差があったmiR-142とmiR-155-5pの発現レベルも測定したが、これらの発現レベルも臨床病理学的因子（TNM stage、静脈浸潤、リンパ管浸潤、家族歴、腫瘍部位など）、疫学的因子（喫煙歴、飲酒歴、BMI index など）、抗癌剤の使用有無、奏功率、予後と有意な関係性を認めなかった。更に、DNAのメチル化と関係するUHRF-1の発現レベルとmiRNAの発現レベルにも関係を認めなかった。以上より、食道癌においてDNAのメチル化の変化はmiRNAの発現レベルに影響を与えるが、癌の悪性度に寄与するmiRNAの同定には至らなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Prognostic value of LINE-1 methylation level in 321 patients with primary liver cancer including hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma. (2018)
  • 著者名/発表者名: Miyata T, Yamashita Y, Baba Y, Harada K, Yamao T, Umezaki N, Tsukamoto M, Kitano Y, Yamamura K, Arima K, Nakagawa S, Okabe H, Imai K, Hashimoto D, Chikamoto A, Shimokawa M, Baba H
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 9 ページ: 20795-20806
  • DOI: 10.18632/oncotarget.25124
  • 査読あり
• [雑誌論文] LINE-1 methylation level and prognosis in pancreas cancer: pyrosequencing technology and literature review. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yamamura K, Kosumi K, Baba Y, Harada K, Gao F, Zhang X, Zhou L, Kitano Y, Arima K, Kaida T, Takeyama H, Higashi T, Imai K, Hashimoto D, Chikamoto A, Tan X, Baba H
  • 雑誌名: Surg Today 巻: 47(12) ページ: 1450-1459
  • DOI: 10.1007/s00595-017-1539-1
  • 査読あり