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2016 年度 実施状況報告書

消化管がんの増殖・進展・転移におけるリンパ管侵襲の役割

研究課題

研究課題/領域番号 15K10106
研究機関大分大学

研究代表者

白石 憲男  大分大学, 医学部, 教授 (20271132)

研究分担者 衛藤 剛  大分大学, 医学部, 講師 (00404369)
平塚 孝宏  大分大学, 医学部, 助教 (20600886)
猪股 雅史  大分大学, 医学部, 教授 (60315330)
赤木 智徳  大分大学, 医学部, 助教 (80572007)
北野 正剛  大分大学, 法人本部, 学長 (90169871)
研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2018-03-31
キーワードリンパ節転移 / リンパ管侵襲 / 遠隔転移 / 分子生物学的解析 / ヒト食道癌
研究実績の概要

[はじめに]本研究の目的は,消化管癌のリンパ節転移やリンパ管侵襲の発生機序を解明し,その臨床的意義を明らかにすることである。3年の研究期間に,癌の予後因子であるリンパ節転移の機序や遠隔転移の有無とリンパ管新生・リンパ管侵襲との関連を分子生物学的手法,免疫組織学的手法,網羅的遺伝子解析,および電子顕微鏡を用いた形態学的手法を用いて解明する。当科では今までに,大腸癌患者におけるリンパ管侵襲とリンパ節転移および予後不良の指標としてのVisinin-like protein-1(VSNL-1)発現の有用性(Akagi T, et al. Int J cancer 2012)や,高感度レクチンアレイを用いた大腸癌の糖鎖プロファイリングによる転移,再発に関与するレクチンの同定(Nakajima K, et al. Cancer Med 2015)を行ってきた。今回は消化管癌の中でも早期からリンパ節転移を来たしやすいとされる食道癌に着目し,リンパ節転移や遠隔転移に関連する遺伝子研究を行う。
[方法]食道癌患者の治療前生検標本から癌部組織および非癌部組織を使用する。組織より抽出したmRNAを用いて,DNAマイクロアレイ法(Agilent scanner)による遺伝子プロファイリングを解析する。癌部/非癌部の遺伝子発現比を算出し,臨床病理学的因子との関連を検討しリンパ節転移やリンパ管侵襲に関わる遺伝子の抽出および機能解析を行う。
[結果]食道癌患者の治療前生検標本から癌部組織および非癌部組織の採取を行った。前年度,33症例の治療前生検標本を採取し,mRNAを抽出,DNAマイクロアレイを行った。現在,リンパ管侵襲に有意に相関する候補遺伝子の発現解析を行ない,分子ネットワーク解析を用いて機能解析をおこなっている。
[まとめ]食道癌のリンパ節転移,リンパ管侵襲に有意に相関する候補遺伝子を同定するため,生検標本を用いてDNAマイクロアレイを行った。今後は臨床病理学的因子と遺伝子発現の評価を用い,リンパ節転移やリンパ管侵襲に関わる候補遺伝子の抽出と機能解析を行っていく。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

リンパ節転移やリンパ管侵襲の機序および臨床的意義を明らかにすることを目的とした本研究において、当初の計画より早く、食道癌患者の生検標本の採集を行い、DNAマイクロアレイを行うことができた。現在、遺伝子発現解析を行なっており、さらに分子ネットワークによる機能解析を行なっている。今後も引き続き研究計画に沿って研究遂行を継続する。

今後の研究の推進方策

本研究においては、3年の研究期間を予定し、癌の予後因子であるリンパ節転移の機序や遠隔転移とリンパ管新生との関連性を分子生物学的手法、免疫組織学的手法、網羅的遺伝子解析、同定された遺伝子の機能解析、および電子顕微鏡を用いた形態学的手法を用いて解明し、その臨床的意義を明らかにしたいと考えている。昨年度までに、ヒト食道癌組織を対象とし、リンパ節転移、リンパ管侵襲、遠隔転移に関連するtranscriptome解析を行った。さらに、病理学的リンパ節転移の有無やリンパ管侵襲の有無を用いてsortingし、リンパ管新生関連遺伝子の同定を行なった。
本年度ではtranscriptome解析の結果から、候補遺伝子の選定、機能解析を進める。具体的には下記内容である。
(1) 病理学的リンパ節転移の有無やリンパ管侵襲の有無を用いてsortingし、リンパ節転移やリンパ管侵襲に関わる候補遺伝子を抽出する。さらに、分子ネットワーク解析を用いて、候補遺伝子の機能解析、絞り込みを行う(5-10遺伝子)。
(2) 候補遺伝子絞り込み後、各候補遺伝子のクローニング、さらに発現ベクターへの組込みを行う。次に、作製されたコンストラクトをヒト培養食道癌細胞株に導入し、導入遺伝子の発現をReal-time RT-PCR及びウエスタンブロット法を用いて mRNA及びタンパク質レベルでの発現を確認する。
(3) 食道癌組織において免疫染色を行い、候補遺伝子に関わるタンパク質の発現を確認する。特に、癌浸潤部局面での発現に注目し、リンパ節転移やリンパ管侵襲の有無により発現に差がないかを確認する。
●本研究期間である3年の間に、消化管がんの増殖・進展に及ぼすリンパ管新生の役割について解析検討する。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2016

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (5件)

  • [雑誌論文] An 80-gene set to predict response to pre-operative chemoradiotherapy for rectal cancer by principle component analysis2016

    • 著者名/発表者名
      Empuku S, Nakajima K, Akagi T, Kaneko K, Hijiya N, Etoh T, Shiraishi N, Moriyama M, Inomata M
    • 雑誌名

      Molecular and Clinical Oncology

      巻: 4(5) ページ: 733-739

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [学会発表] 高感度レクチンアレイを用いた胃癌,大腸癌の糖鎖プロファイリング-新しい診断,感受性マーカーの確立-2016

    • 著者名/発表者名
      中嶋健太郎、二日市琢良、平塚孝宏、上田貴威、白下英史、衛藤剛、白石憲男、猪股雅史
    • 学会等名
      第71回日本消化器外科学会総会
    • 発表場所
      あわぎんホール(徳島県徳島市)
    • 年月日
      2016-07-14 – 2016-07-16
  • [学会発表] 主成分解析を用いた直腸癌に対する術前化学放射線療法の感受性を予測する80遺伝子セットの同定2016

    • 著者名/発表者名
      圓福真一朗、中嶋健太郎、赤木智徳、平塚孝宏、上田貴威、當寺ヶ盛学、白下英史、衛藤剛、白石憲男、猪股雅史
    • 学会等名
      第71回日本消化器外科学会総会
    • 発表場所
      あわぎんホール(徳島県徳島市)
    • 年月日
      2016-07-14 – 2016-07-16
  • [学会発表] 高感度レクチンアレイを用いた消化管癌の糖鎖プロファイリング2016

    • 著者名/発表者名
      圓福真一朗、中嶋健太郎、赤木智徳、平塚孝宏、田島正晃、柴田智隆、上田貴威、當寺ヶ盛学、白下英史、衛藤 剛、白石憲男、猪股雅史
    • 学会等名
      第21回癌と遺伝子・大分外科フォーラム
    • 発表場所
      レンブラントホテル大分(大分県大分市)
    • 年月日
      2016-07-04 – 2016-07-04
  • [学会発表] 局所進行直腸癌に対する術前化学放射線療法の感受性を判別する80遺伝子セットの同定2016

    • 著者名/発表者名
      圓福真一朗、中嶋健太郎、赤木智徳、平塚孝宏、田島正晃、柴田智隆、上田貴威、當寺ヶ盛学、白下英史、衛藤 剛、白石憲男、猪股雅史
    • 学会等名
      第20回日本がん分子標的治療学会
    • 発表場所
      別府国際コンベンションセンター B-CON PLAZA(大分県別府市)
    • 年月日
      2016-05-30 – 2016-06-01
  • [学会発表] 当院における進行胸部食道がんに対する術前DCF療法の短期成績2016

    • 著者名/発表者名
      藤島紀、柴田智隆、錦耕平、平塚孝宏、赤木智徳、田島正晃、麓祥一、上田貴威、當寺ヶ盛学、白下英史、衛藤剛、白石憲男、猪股雅史
    • 学会等名
      第116回日本外科学会
    • 発表場所
      大阪国際会議場(大阪府大阪市)
    • 年月日
      2016-04-14 – 2016-04-16

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公開日: 2018-01-16  

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