研究課題/領域番号 |
15K10369
|
研究機関 | 埼玉医科大学 |
研究代表者 |
安達 淳一 埼玉医科大学, 医学部, 准教授 (70291143)
|
研究分担者 |
西川 亮 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (90237678)
|
研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
キーワード | glioma / CSF / DNA / genetic |
研究実績の概要 |
固形腫瘍を持つ患者の血漿や髄液などの体腔液中に腫瘍由来の cell free DNA が検出されることが報告されている。このDNAは腫瘍の壊死やアポトーシスに陥った組織から溶出した腫瘍DNAが体循環内へと入るものとされている。 グリオーマにみられる遺伝子変異の中で、IDH1変異、MGMTプロモーターメチル化、BRAF及びH3F3A遺伝子変異はグリオーマの診断、予後予測、治療反応性を示すバイオマーカーとして、その解析の重要性が高まっている。 そこで、我々はグリオーマ患者の腫瘍から溶出した、髄液中のcirculating cell free (ccf) DNAを検出して上記遺伝子変異の検出が可能かどうかを検討した。 方法は、グリオーマ患者に対して、髄液検査用に採取した脳脊髄液の残液を解析に用いた。髄液1ml からMaxwell rapid sample concentrator システムを用いてccfDNAを抽出した。続いて、real-time PCR/高解像能融解曲線分析法でIDH1,H3F3A, BRAF遺伝子の点突然変異の有無をスクリーニングし、DNAシークエンス法にて変異を同定した。また、一部の症例からはMGMT遺伝子プロモーターメチル化の状態をメチル化特異的高解像能融解曲線分析法で解析した。実際に摘出した腫瘍組織から抽出したDNAに対しても、同様のassay法にて遺伝子異常について解析を行い、髄液ccfDNAから得られた結果と対比させた。さらに、一部の症例からは血漿中のccfDNAの抽出も併せて行い上記遺伝子異常の検出が可能かどうか検討した。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
1mlの脳脊髄液から10ng以上のccfDNAが得られることが判明し、real-time PCR/高解像能融解曲線分析法での解析が可能であった。IDH1,H3F3A, BRAF遺伝子異常について、髄液由来ccfDNAと摘出された腫瘍から抽出したDNAにおける解析結果が全例で一致した。MGMT遺伝子プロモーターメチル化の状態を解析した2例でもメチル化につき定量的に解析が可能であった。尚、血漿中のccfDNAからは遺伝子変異は検出されなかった。
|
今後の研究の推進方策 |
髄液中のccfDNAを用いた遺伝子解析により、直接腫瘍組織を得ることなく、低侵襲でグリオーマ患者の診断、予後の判定に有用な分子マーカー解析が行える可能性が示唆された。さらなる症例集積を行い検証作業を進めてゆく予定である。
|
次年度使用額が生じた理由 |
学会発表回数が当初の予定より少なかったため
|
次年度使用額の使用計画 |
さらに研究成果を充実させて、学会発表や論文発表の準備に使用予定である。
|