脳水チャネルアクアポリンのRNAｉ機能調節による脳浮腫抑制の臨床応用

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K10526
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 藤田 義人 愛知医科大学, 医学部, 教授 (90238593)
• 研究分担者: 浅井 清文 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (70212462)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: アストロサイト / 脳低温 / 脳浮腫 / ノックダウン

研究実績の概要

神経系の細胞のRNAiはinvitrogen社製のLentiviral RNAi systemを利用した。293FTセルラインでレンチウイルスを発現させるため、作成したpLenti4/BLOCK-IT/Expression Constructに加え、レンチウイルスの作成能力を高めるpLP1、pLP2、pLP/VSVG、pENTER-gusのプラスミドをcotransfectさせた。以上により目的となるAQP　Knockdown のshRNAiを発現するレンチウイルスの作成を完了した。アストロサイトのAQP4発現量を、RT-PCRで確認した。以前のKnockdownの発現率に比較して、強くKnockdownしていることが確認できた。
hAPQ4-M23に関しては、permanent cell line を、蛍光顕微鏡の蛋白発現と、ウエスタンブロッティングでの蛋白発現の確認を終え、完成させた。Wild-typeのアストロサイトに導入し、overexpressionできることを確認した。
低酸素負荷によりAQP knockdownと、overexpression　細胞株のphenotypeの形態学変化、培養液の変化を観察した。細胞傷害がネクローシスかアポトーシスによるものかをフローサイトメトリーで検討している。
再酸素化を行う際の至適酸素濃度の決定のため、高濃度の酸素の影響を調べた。50％と80％の条件での培養で細胞傷害を確認した。アストロサイトだけでなく、神経細胞であるSH-SY5Yの培養系でも同様の傷害を確認した。高濃度の酸素傷害を低温が軽減できるかを検討している。またエリスロポエチンが、脳での免疫を司るマイクログリアのLPSで誘導される炎症性サイトカインの誘導を抑制することを見出した。今後さらに脳低温療法の効果の向上に寄与する方策を検討したい。

研究成果

• [雑誌論文] Effect of maternal low-glucose during Cesarean section neonatal hypoglycemia (2018)
  • 著者名/発表者名: 1.Saya Yoshizawa, Yoshihito Fujita, Maiko Hoshika, Nobuyoshi Kusama, Kazuya Sobue
  • 雑誌名: J Anesthesiol Cli Sci. 巻: 7 ページ: 2
  • DOI: http://dx.doi.org/10.7243/2049-9752-7-2
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Effect of 2- or 4-hour oral intake restriction on intraoperative intravascular volume optimization using stroke volume variation analysis: A single-blinded randomized control trial. (2018)
  • 著者名/発表者名: 2.Maiko Hoshika, Yoshihito Fujita, Saya Yoshizawa, Megumi Harima, Kazuya Sobue.
  • 雑誌名: Korean J Anesthesiol 巻: 71 ページ: 印刷中
  • DOI: https://doi.org/10.4097/kja.d.17.00012
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Early Enteral Nutrition is Acceptable in Cyanotic Patients with Systemic-Pulmonary Shunt after Cardiovascular Surgery (2017)
  • 著者名/発表者名: 3.MinHye So, Shinichiro Yoshimura, Yoshihito Fujita, Takeshi Sugiura, Nobuyoshi Kusama, Kazuya Sobue.
  • 雑誌名: J Regl Anesth Intensive Care. 巻: 1 ページ: 1-4
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Effect of different surgery procedures on the accuracy of prediction of the plasma concentration of fentanyl: compareson between mastectomy and laparoscopic prostatectomy (2017)
  • 著者名/発表者名: 4.Yoshihito Fujita, Saya Yoshizawa, Maiko Hoshika, Koichi Inoue, Shoko Mastusshita, Hisao Oka, Kazuya Sobue
  • 雑誌名: JA Clinical Reports 巻: 3 ページ: 30
  • DOI: 10.1186/s40981-017-0097-2
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Cardiac arrest caused by rapidly increasing ascites in a patient with TAFRO syndrome: a case report (2017)
  • 著者名/発表者名: 5.Masatoshi Okumura, Atsushi Ujiro, Yasunori Otsuka, Hiroshi Yamamoto, Sho Wada, Hirofumi Iwata, Toshiaki Kan, Seiji Miyauchi, Atsushi Hashimoto, Yuko Sato, Yoshihito Fujita, Yoshihiro Fujiwara, Hideki Shimaoka
  • 雑誌名: Acute Medicine & Surgery 巻: 4 ページ: 344-348
  • DOI: 0.1002/ams2.278
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Correlations between dosage and plasma dexmedetomidine concentrations in critically ill infants: a prospective, observational cohort study (2017)
  • 著者名/発表者名: 6.Yoshihito Fujita, Koichi Inoue, Tasuku Sakamoto, Saya Yoshizawa, Maiko Tomita, Toshimasa Toyo’oka, Kazuya Sobue.
  • 雑誌名: Korean J Anesthesiol 巻: 70 ページ: 426-433
  • DOI: https://doi.org/10.4097/kjae.2017.70.4.426
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] rogrammed intermittent bolus infusion reduces phrenic paralysis associated with interscalene block (2017)
  • 著者名/発表者名: Takayanagi H, Tanaka K, Sato Y, Fujita Y, Fujiwara Y
  • 学会等名: Annual Meeting of American Society Anesthesiologist
  • 国際学会
• [学会発表] Continuous rectus sheath block provides effective analgesia after breast reconstruction with free abdominal flap (2017)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto A, Takayanagi H, Kanamori H, Sato Y, Fujita Y, Fujiwara Y
  • 学会等名: Annual Meeting of American Society Anesthesiologist
  • 国際学会
• [学会発表] Inhibition of T-type Ca2+ channel induces human neuroblastoma cell death and enhances neurotoxicity of bupibacaine (2017)
  • 著者名/発表者名: Tanaka K., Sakakibara K., Hashimoto A. Feng G.G., Fujita Y., Fujiwara Y
  • 学会等名: Annual Meeting of the European Anesthesiology
  • 国際学会
• [学会発表] Programmed intermittent bolus infusion for interscalene block reduces the incidence of phrenic paralysis on the first postoperative day in patients having shoulder surgery (2017)
  • 著者名/発表者名: Tanaka K., Shikata Y., Fujita Y., Hashimoto A., Sato Y., Fujiwara Y
  • 学会等名: Annual Meeting of the European Anesthesiology
  • 国際学会
• [学会発表] The long-term efficacy and safety of rocuronium and sugammadex in patients undergoing renal transplantation. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ono Y., Fujita Y., Hashimoto A., Sato Y., Fujiwara Y.
  • 学会等名: Annual Meeting of the European Anesthesiology
  • 国際学会