| 研究課題/領域番号 |
15K10550
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
花崎 元彦 国際医療福祉大学, 医学部, 教授 (60379790)
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| 研究分担者 |
千葉 義彦 星薬科大学, 薬学部, 教授 (00287848)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 虚血再潅流傷害 / 肺移植 / 麻酔薬 / マイクロRNA / RhoA/Rho-kinase |
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| 研究実績の概要 |
ラット虚血再灌流(I/R)傷害肺を用いてmiRNAマイクロアレイ解析を行ったところ、コントロール群と比較してI/R群で70種類以上のmiRNAsに2倍以上の発現減少あるいは増加が認められた。リアルタイムRT-PCR法を用いて検討を行ったところI/R群でmiR-133a-3pの有意な発現低下が確認でき、TarBase等のデータベース検索よりそのターゲットとしてRhoAが推測された。実際に、I/R群の肺組織においてRhoAタンパク質発現の有意な増加が認められた。したがって、miR-133a-3p発現低下によるRhoA/Rho-kinase系の亢進が肺I/R傷害に関与している可能性を示唆した。一方、DNAアレイを用いてI/R傷害肺における発現変動遺伝子の網羅的解析を試みたところ、アレイ搭載の27,147遺伝子のうち、コントロール群と比較して1.5倍以上発現変動した遺伝子396種 (増加153、減少243) を見出した。発現増加した153遺伝子の機能とその傾向についてGO Slim機能分類解析を行ったところ、biological processのうちresponse to stress、aging およびcell differentiationの割合が有意に増加していた。発現増加遺伝子群を用いたPathway解析の結果、Hypertrophy ModelやMAPK signaling pathway等の亢進が示唆され、比較的短時間のうちに各種遺伝子発現がダイナミックに変動し、I/R傷害がもたらされる可能性を示唆した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
順調だが、下記に述べる通り、若干の遅れを生じている。
miRNA マイクロアレイ解析でコントロール群、虚血再潅流傷害群の比較を行い、RhoA/ Rho-kinase 系の亢進が肺虚血再潅流傷害に関与している可能性を見出したため、セボフルラン群を交えた3群の比較により虚血再潅流傷害およびセボフルランの臓器保護効果メカニズムを解明する、という明解なプランが立てられている。
ただし研究代表者である花崎が平成29年度より、川崎医科大学より国際医療福祉大学に転出することとなり研究の拠点を移した。川崎医科大学の研究室をすべて閉鎖し、転勤とともに新たな研究環境を構築する作業に時間を要したため研究が一時中断、その結果、遅延が生じた。
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| 今後の研究の推進方策 |
アレイ解析結果のvalidationを行うとともに、バイオインフォマティック解析の情報も合わせてmiRNAのターゲット遺伝子を予測して実際に同定するとともに、セボフルランの効果について評価を行い、その臓器保護作用のメカニズム解明に迫る。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）概ね順調に進んだが、研究代表者である花崎が川崎医科大学より国際医療福祉大学に転出することが決まったため、研究の拠点を移すこととなった。これにより研究が一時中断、遅延が生じたため次年度への期間延長を申請した。
（使用計画）肺虚血再潅流傷害モデルから得られた標本を用い、ウェスタンブロットやリアルタイムPCRなど生化学的解析を続けるため消耗品(試薬、抗体)に用いる。
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