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平成27年から29年度は気管支平滑筋過敏性発現におけるRhoA-ROCK系の亢進を再確認するとともに、解析に用いるサンプル調製を行った。Wistar系雄性ラットをpentobarbital麻酔下に肺門部で肺動静脈をクランプすることにより左肺を30分間虚血 (I) 状態にした。その後クランプを解放して左肺を60分間再灌流 (R) して肺I/R傷害モデルを作製した。R終了後に左肺摘出しtotal RNAおよびタンパク質サンプルを調製した。
Western blot法による解析ではSham群と比較してI/R群の肺組織においてRhoAおよびROCK2タンパク質発現レベルが有意に増大しており、I/R傷害時のRhoA/ROCK系亢進が確認できた。miRNAマイクロアレイ解析ではsham群と比較してI/R群で70種類以上のmiRNAsに2倍以上の発現減少／増加が認められた。リアルタイムRT-PCR法を用いた検討ではI/R群でmiR-133a-3pが有意に発現低下しターゲットとしてRhoAが推測された。I/R群の肺組織においてRhoA発現の有意な増加を認めmiR-133a-3p発現低下によるRhoA/Rho-kinase系亢進が肺I/R傷害に関与している可能性を示唆した。
miRNA マイクロアレイ解析でRhoA/ Rho-kinase 系の亢進が肺虚血再潅流傷害に関与している可能性を見出したため、平成30年度はI/R群と同様のプロトコルに吸入麻酔薬セボフルラン（Sev）を加えたSev群のサンプルを採取し、先の2群と合わせ合計3群での比較を行った。現在はその解析結果を検証し、論文を準備している。
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