癌幹細胞を標的とした樹状細胞による免疫療法の開発

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K10606
• 研究機関: 和歌山県立医科大学
• 研究代表者: 原 勲 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (10263378)
• 研究分担者: 山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (20191190) ; 尾島 敏康 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60448785)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 腫瘍免疫学 / iPS細胞 / 樹状細胞 / 癌幹細胞

研究実績の概要

樹状細胞によるDNAJB8を標的とした腎癌免疫療法の有用性を評価するために、前実験として細胞傷害性T細胞（CTL）が認識するDNAJB8由来抗原エピトープの同定を行った。HLA-A24に結合する抗原エピトープの構造を設計し、HLA-A24陽性の健常者から採取した末梢血単核球（PBMC）をマグネットビーズを用いてCD8+細胞とCD8-細胞に分離し、CD8-細胞からPHA芽球を誘導して、この細胞群にペプチドをパルスし、抗原提示細胞として以下の実験に用いた。分離したCD8+細胞をペプチド刺激したPHA芽球で刺激しペプチド特異的CTLを誘導後、抗原特異性をIFN-γ assayで確認した。CTLの細胞傷害性はLDH release assayで確認した。CTLを誘導できたペプチドの配列がマウスDNAJB8の配列と一致していた。HLA-A24とマウスMHCの一つであるH-2Kdのbinding motifはその構造がよく一致していることが一般的に知られている。この事実を利用して同定した配列のペプチドをBalb/cマウスに免疫することにより、in vivoの免疫でマウス腎癌細胞株であるRenCaに対しCTLが誘導できることを確認した。最終的に上記ペプチドを免疫したマウスに対しRenCaを皮下接種し腫瘍サイズを測定したところペプチド免疫により皮下腫瘍の増大は有意に抑制された。
DNAJB8発現iPS細胞を得るためにDNAJB8を強制発現したbalb/3T3細胞をレトロウイルスベクターを用いて作成し、前述と同様に山中４因子を遺伝子導入し、DNAJB8を強制発現するbalb/cマウス由来iPS細胞を作成を試みたが安定した細胞株を得るのが難しく今後条件を変更しながら研究を進めていく予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Cellular stress induces cancer stem-like cells through expression of DNAJB8 by activation of heat shock factor 1 (2018)
  • 著者名/発表者名: Kusumoto H, Hirohashi Y, Nishizawa S, Yamashita M, Yasuda K, Murai A, Takaya A, Mori T, Kubo T, Nakatsugawa M, Kanaseki T, Tsukahara T, Kondo T, Sato N, Hara I, Torigoe T
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 109 ページ: 741-750
  • DOI: 10.1111/cas.13501
  • 査読あり / オープンアクセス