| 研究実績の概要 |
近年、多くの腫瘍抗原がcytotoxic T lymphocytesを誘導することが確認されており、その腫瘍抗原のペプチドを利用した癌ペプチドワクチン療法の有効性が報告されている。現在、癌ワクチン療法の適応はHLA-A2,-A24陽性患者のみで臨床に応用できるHLA-A3 supertype alleles拘束性の癌ペプチドは無いのが現状である。この状況を打開するためにHLA-A3 super type拘束性のペプチド同定を目的とした。本研究に対し同意を得た前立腺癌患者より末梢血30ccを採取し、Ficoll-Conray液による末梢血単核球細胞を遠心分離とフローサイトメトリーにて同定したHLA-A3 supertype allelesのうちHLA‐A11,-A31,-A33陽性のものを対象とした。3種類の前立腺癌関連抗原（PTH-rP,EGFR,EZH2）のクラスⅠ拘束性ペプチドを1抗原3～5種類合成した。次にHLA-A1101,-A3101,-A3303強発現LNCaPトランスフェクタントを樹立した。HLAタイピング及びPBMCの採取を施行しHLA-A3 supertype alleles陽性例であった12例に対し各ペプチドにてPBMCを刺激しC1R-A11,-A31,-A33をtargetとしCTLassayを施行したところEZH2ペプチドの1種のEZH2733-741に対し12例中7例にてペプチド特異的CTLの誘導を確認した。次にCTLの誘導を認めたEZH2733-741にて刺激されたCD8+CTLsにて6時間51Cr release assayでLNCaP,LNCaP-A11,-A31,-A33に対してのcytotoxicityを確認した。HLA-A11,-A31,-A33陽性患者各２例にてHLA-A3拘束性ペプチド特異的cytotoxicityを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
3種類の前立腺癌関連抗原（PTH-rP,EGFR,EZH2）のクラスⅠ拘束性ペプチドにてPBMCを刺激しC1R-A11,-A31,-A33をtargetとしCTLassayを施行したところ最もペプチド特異的CTLの誘導を確認できたEZHペプチドの1種のEZH2733-741に対し同ペプチドにてpulseされたCD8+CTLsにて6時間51Cr release assayを施行。HLA-A11,-A31,-A33陽性患者各2例にてHLA-A3拘束性ペプチド特異的cytotoxicityを確認できた。またペプチド刺激されたCTLsの特異性をcold inhibition assayにて確認した。具体的には51Cr-labeled target cells(2×103/well)を2×10４effector cellと2×10４cold target cellと共に培養しcold target cellとしてHIVまたはペプチドを刺激したC1R-A11,C1R-A31,C1R-A33を使用した。HLA-A11,-A31,-A33陽性患者各2例にてにてEZH2733-741を刺激したcold target cellにより51Cr-labeled target cellへのcytotoxicityが抑制されペプチド刺激されたCTLsの特異性を確認した。さらに他の2種類の前立腺癌関連抗原(PTH-rP, EGFR)に対し同様のCTLassayを現在6症例まで施行した。
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