| 研究課題/領域番号 |
15K10626
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
伊藤 恭典 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 研究員 (70295608)
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| 研究分担者 |
郡 健二郎 名古屋市立大学, その他部局等, 学長 (30122047)
戸澤 啓一 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (40264733)
安井 孝周 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (40326153)
岡田 淳志 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (70444966)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 尿路結石症 / メタボリックシンドローム / 酸化ストレス / オステオポンチン / OPN KOマウス / DNAマイクロアレイ / transgenic mouse / PPARγアゴニスト |
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| 研究実績の概要 |
１.遺伝因子からのアプローチ
結石モデルマウス、OPN KOマウス、OPNプロモーター領域のトランスジェニックマウスをglyoxylate100mg/kgを14日間腹腔内投与し結石形成の有無をPizzolato染色、偏光顕微鏡で観察した。健常者のOPN cDNA遺伝子と結石患者に特異的なexon7にSNPsをもつOPNcDNA遺伝子を作成し変異の有無による2種類のOPN蛋白を生成する。腎尿細管細胞に添加し、シュウ酸カルシウム結晶と尿細管細胞との接着能を検討した。腎尿細管細胞を三次元培養し8週間で結石が形成される実験モデルをを用い生成したOPN蛋白を添加しOPNのSNPsによる結石形成への機能を検討した。SNPsをもつOPNcDNAを発現ベクターに組み込み尿細管細胞にstable tranfectionして発現蛋白が蛍光ラベルされるように樹立し、遺伝子導入したSNPsをもつOPN蛋白の細胞内局在を免疫染色、共焦点顕微鏡を用いて三次元的に観察した。
２.環境因子からのアプローチ
尿路結石から抽出した蛋白を各種adipocytokineの抗体を用いて結石内での局在を検討した。
PPARγアゴニスト 4mg/dayを結石モデルラットに腹腔内投与し、結石形成抑制効果、adipocytokineの発現を検討した。結石形成三次元培養細胞モデルにPPARγアゴニストを添加し結石形成抑制効果を検討した。動脈硬化症の抑制に働いていることが報告されているadipocytokineが結石形成に関与していることを確認したうえで、結石形成モデルマウスに腹腔内投与してadipocytokineの結石形成への関与を調べた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
遺伝因子からのアプローチとして、結石モデルマウス、OPN KOマウス、OPNプロモーター領域のトランスジェニックマウスをglyoxylate100mg/kgを14日間腹腔内投与し結石形成の有無をPizzolato染色、偏光顕微鏡で観察した。
また環境因子からのアプローチとして、尿路結石から抽出した蛋白を各種adipocytokineの抗体を用いて結石内での局在を検討した。
上記のごとく、現在までの進捗状況は、おおむね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
OPN promoter領域を含むplasmidを尿細管細胞に遺伝子導入し、haplotypeによる変化をCAT assay、ルシフェラーゼassayで検討し、脂質、抗酸化剤の作用を調べる。さらに結石モデルマウスに遺伝子導入して結石形成とOPN遺伝子の発現への影響を検討する。
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