ARID1A遺伝子変異を基盤とした卵巣明細胞腺癌発生機構の解明

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K10717
• 研究機関: 島根大学
• 研究代表者: 中山 健太郎 島根大学, 医学部, 准教授 (70346401)
• 研究分担者: 京 哲 島根大学, 医学部, 教授 (50272969)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 卵巣明細胞癌 / ARID１A / 子宮内膜症

研究実績の概要

Endometriosis related ovarian neoplasms（ERONs）はエンドメトリオーシスから発生する卵巣悪性腫瘍の総称であり、明細胞癌、類内膜癌、Seromucinous borderline tumorが含まれる。以前、我々はp53変異を基盤とした子宮内膜症の発癌モデルを構築したがマウス移植実験では想定外の結果であった。そこで、新たに子宮内膜症の間質細胞の混入を完全に除外した子宮内膜症不死化細胞EMOsis-CC/TERT10細胞を樹立し、ARID1A変異を基盤としたERONs in vitro発癌モデルを構築する事を目的とした。さらにARID1A変異ERONsに対するARID1Bを標的とした治療戦略についても検討した。子宮内膜症性嚢胞の手術検体を初代培養し、上皮成分だけを分離し、cyclinD1、CDK4、hTERTの遺伝子導入をレンチウイルスベクターにて行った。Pancytokeratin、Calretininのウエスタンブロット法により不死化細胞が上皮細胞由来であるかを確認した。この細胞にCRISPR/Cas9システムを用いてARID1Aの遺伝子ノックアウトを行いEMOsis-CC/TERT10ARID1A-/-細胞のクローニングを行った。リキッドマイクロダイセクション（初代培養＋anti-EpiCAM-conjugated beadsとマグネットを用いたセルソーティング）を用いたERONsのmutation解析では19/21（90％）にARID1A変異を認めた。ARID1A遺伝子ノックアウトでは100個のクローンを採取し、3クローンがARID1Aホモ変異であった。EMOsis-CC/TERT10ARID1A-/-細胞でARID1Bをノックダウンすると細胞増殖が抑制された。現在、EMOsis-CC/TERT10ARID1A-/-細胞に変異型K-ras、PIK3CA, c-mycの遺伝子導入を行っており、マウス移植実験で組織型を確認中である。

研究成果

• [雑誌論文] Affinity-purified DNA-based mutation profiles of endometriosis-related ovarian neoplasms in Japanese patients. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishikawa M, Nakayama K, Nakamura K, Ono R, Sanuki K, Yamashita H1, Ishibashi T, Minamoto T, Iida K, Razia S, Ishikawa N, Kyo S.
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 9 ページ: 14745-14763
  • DOI: 18632/oncotarget
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Loss of beclin 1 expression in ovarian cancer: a potential biomarker to predict unfavorable outcome. (2018)
  • 著者名/発表者名: Minamoto T, Nakayama K, Nakamura K, Katagiri H, Sultana R, Ishibashi T, Ishikawa M, Yamashita H, Sanuki K, Iida K, Nakayama S, Otsuki Y, Ishikawa N, Kyo S.
  • 雑誌名: Oncol Lett 巻: 15 ページ: 1170-1176
  • DOI: 10.3892/ol.2017.7379
  • 査読あり
• [雑誌論文] Microsatellite instability is a potential biomarker for immune checkpoint inhibitors in endometrial cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yamashita H, Nakayama K, Ishikawa M, Nakamura K, Ishibashi T, Sanuki K, Ono R, Sasamori H, Minamoto T, Iida K, Sultana R, Ishikawa N, Kyo S.
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 9 ページ: 5642-5654
  • DOI: 10.18632/oncotarget.23790
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Reconstitution of high-grade serous ovarian carcinoma from primary fallopian tube secretory epithelial cells. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nakamura K, Nakayama K, Ishikawa N, Ishikawa M, Sultana R, Kiyono T, Kyo S.
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 9 ページ: 12609-12619
  • DOI: 10.18632/oncotarget.23035
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Nucleus accumbens-1/GADD45GIP1 axis mediates cisplatin resistance through cellular senescence in ovarian cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nakayama K, Rahman M, Rahman MT, Nakamura K, Sato E, Katagiri H,Ishibashi T, Ishikawa M, Iida K, Razia S, Ishikawa N, Kyo S.
  • 雑誌名: Oncol Lett 巻: 13 ページ: 4713-4719
  • DOI: 10.3892/ol.2017.6099
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Microsatellite instability is a potential biomarker for immune checkpoint inhibitor in endometrial cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yamashita H, Nakayama K, Ishikawa M, Ishibashi T, Nakamura K, Sanuki K, Ono R, Sasamori H, Minamoto T, Iida K, Sultana R, Ishikawa N, Kyo S.
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Successful reconstitution of high-grade serous ovarian carcinoma in vivo from primary fallopian tube secretory epithelial cells. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nakamura K, Nakayama K, Kiyono T, Ishikawa N, Minamoto T, Ishibashi T, Sanuki K, Yamashita H, Sasamori H, Sultana R, Ishikawa M, and Kyo S.
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Exome sequencing in a dedifferentiated mucinous ovarian carcinoma (2017)
  • 著者名/発表者名: Sanuki K, Nakayama K, Nakamura K, Minamoto T,Ishibashi T,Yamashita H, Ono R, Sasamori H, Razia S, Hossain M, Ishikawa M, Kyo S.
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2017
  • 国際学会