卵巣癌における膜型エストロゲン受容体GPR30を標的としたEMT現象の制御

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K10738
• 研究機関: 大阪医科大学
• 研究代表者: 藤原 聡枝 大阪医科大学, 医学部, 講師 (90707960)
• 研究分担者: 林 正美 大阪医科大学, 医学部, 講師 (00551748) ; 大道 正英 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10283764) ; 田中 良道 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10625502) ; 金村 昌徳 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (40298782) ; 恒遠 啓示 大阪医科大学, 医学部, 講師 (70388255) ; 田辺 晃子 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (70454543) ; 佐々木 浩 大阪医科大学, 医学部, 助教 (80432491) ; 寺井 義人 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (90278531)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 卵巣癌 / GPR30 / EMT

研究実績の概要

卵巣癌細胞株を用いてGPR30を強制発現させた、卵巣癌白金製剤感受性株（A2780）および白金製剤耐性株（Caov-3）のEMT関連因子の発現と細胞特性（細胞形態の変化、浸潤能など）への影響について検討を行った。
細胞特性に関して、GPR30の選択的アゴニストであるG1を用いてGPR30を刺激した時のEMT現象による間葉系細胞への細胞形態変化と細胞集塊の形成の有無について、2D培養および3D培養を用いて位相差顕微鏡で検討を行った。
次に、GPR30の選択的アゴニストであるG1を用いてGPR30を刺激し、刺激を行う前後の細胞からRNAまたは蛋白を抽出し、EMT関連因子（E-cadherine、Snail）、上皮系マーカー（AE1/AE3）、間葉系マーカー（Vimentin）の発現をmRNAレベルはQuantitative PCR、蛋白発現はWestern Blotting法にて解析を行った。
結果、GPR30を刺激することで、2D培養では卵巣癌細胞は間葉系細胞様の形態に変化し、3D培養下ではsphereの形成を認め上皮性細胞のEMT化が推測された。2D培養下および3D培養下より、GPR30選択的アゴニストにより刺激を行う前後の細胞より採取したRNA、蛋白を用いて行ったQuantitative PCR法、Quantitative PCRはいずれもアゴニストによる刺激前に比較して刺激後は、EMT関連因子であるE-cadherineの発現低下、Snailの発現上昇、上皮系マーカーAE1/AE3の発現低下、間葉系マーカーVimentinの発現上昇を認め、分子生物学的にもEMT化が証明された。

研究成果

• [学会発表] GPR30 signaling regulates Epithelial-Mesenchymal Transition in ovarian cancer (2018)
  • 著者名/発表者名: 藤原聡枝 田中良道 田中智人 恒遠啓示 佐々木浩 寺井義人 大道正英
  • 学会等名: International Gynecologic Cancer Society 2018
  • 国際学会