| 研究課題/領域番号 |
15K10786
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
白崎 英明 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (30260772)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | GPR99 / ロイコトリエンE4 / アレルギー性炎症 |
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| 研究実績の概要 |
.ヒト鼻粘膜の手術サンプルを用い、GPR99に対する市販の抗体にて解析した。ウスタンブロット法にてヒト鼻粘膜に３８KDaのシングルバンドを確認した。免疫組織化学的にGPR99受容体は血管平滑筋に主に局在していることを明らかにした。予想に反し、好酸球などの浸潤白血球におけるタンパクレベルでの発現は確認できなかった。得られた以上の結果は、英文誌に投稿中である。
同時に好酸球細胞株EoL-1を用いBoydenチャンバー法による細胞遊走実験を行っているが、ロイコトリエンエンE4により細胞遊走が引き起こることを確認している。EoL-1細胞にはGPR９９のタンパクレベルでの発現は確認されなかったため、ロイコトリエンE4による好酸球遊走にはGPR99受容体以外の受容体が関与している可能性が考えられる。他のロイコトリエン受容体に対する拮抗剤（CysLT１受容体拮抗剤、CysLT２受容体拮抗剤、P２Y１２受容体拮抗剤など）を用い、ロイコトリエンエ４による好酸球遊走や活性化がどの受容体が関与しているか研究を進める予定である。
また、ヒト鼻粘膜の血管平滑筋に発現しているGPR９９受容体の役割を調べる目的で、ヒト培養血管平滑筋細胞を用いて、ロイコトリエンE4刺激で実際に細胞内カルシウムの上昇が惹起されるかについて、つまり血管平滑筋に発現するGPR９９の機能について確認し、上気道アレルギー性炎症におけるGPR99受容体の役割を明らかにする研究に発展させたい。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
GPR９９の局在を明らかにして、英文誌に投稿中であるため概ね研究は順調に推移していると考えている。
しかしながら、好酸球にGPR９９の発現が確認されないため、ロイコトリエンE4による好酸球性炎症にGPR９９の関与は少ないと思われるので、研究方向の修正が必要である。
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| 今後の研究の推進方策 |
ロイコトリエンE4の受容体をして他施設から報告された本受容体が、ロイコトリエンE4による好酸球浸潤に関与すると想定されて本研究がはじまった。In vitroにおいてもアレルギー性鼻炎鼻粘膜に好酸球にGPR９９受容体タンパクの発現が確認されないため、ロイコトリエンE4による好酸球遊走と活性化には他の受容体が関与する可能大である。
それを明らかにすることを目的をして、ロイコトリエンE4による好酸球遊走や細胞カルシウム上昇の実験系を中心に、各種拮抗薬を入手して研究を進めたい。
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