|
研究課題「頭頸部癌治療における高濃度酸素療法の可能性とロックス1発現に関する検討」において、本研究の最終目的は頭頸部癌に有効な新規治療法を確立することであった。
この目的を達成するための目標に、まず分子生化学的手法を用いて、ロックス1の癌細胞に及ぼす分子生化学的機序を解明することを挙げた。
具体的手順として①ヒトロックス1遺伝子のcDNAクローニング、②各種発現ベクターの構築、③ロックス1に対する抗体の作製、④酵母ツーハイブリッド法による基質タンパク質の同定、⑤ロックス1とその結合タンパク質に関する細胞生物学的解析を挙げた。さらに補助実験として細胞増殖アッセイ、フォーカスアッセイ、コロニーフォーメーションアッセイ、ヌードマウスへの移植実験、ボイデンチャンバー法などが計画された。
これらのうち①cDNAクローニングおよびシークエンス、②発現ベクターの作製（哺乳類発現ベクター系: pcDNA3、大腸菌発現ベクター系: pGEX-6pおよびpET30、酵母発現ベクター系: pBTM116、レトロウイルス発現系: pMX-puro）、③抗ロックス1抗体の作製、④頭頸部癌細胞株および頭頸部癌組織におけるロックス1、P53、cyclinD1 の発現解析、⑤頭頸部癌細胞株(HEp2細胞、KB細胞)や生検材料、手術検体の癌組織におけるロックス1 の発現および細胞内局在や安定性の解析、⑥頭頸部以外の癌組織におけるロックス1の発現との比較検討はすでに終了している。
以上に加え次年度に向けてin vivo実験の一部についても着手した。すなわち癌遺伝子を組み込んだトランスジェニックラットを使用して発癌モデルラットを作製した。これを用いて現在高濃度酸素環境下における癌の生物学的特質の変化についての検討を開始している。
|
