自己免疫性ぶどう膜炎における摂食抑制ペプチドの機能解析

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K10896
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 武田 篤信 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (40560313)
• 研究分担者: 木村 和博 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60335255)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: ぶどう膜炎 / 炎症 / Tリンパ球

研究実績の概要

マウス実験的ぶどう膜炎（EAU）誘導眼における摂食関連ペプチドニューロメジンU（NmU）受容体1及びNmU受容体2の発現を免疫染色法で調べたところ、NmU受容体1は網膜色素上皮細胞（RPE）、毛様体上皮細胞、虹彩上皮細胞（IPE）、網膜ミューラー細胞に、NmU受容体2はRPE、毛様体上皮細胞、IPEに発現がみられた。In vitroにおいて、RPEを、マイトマイシンCで処理した脾臓細胞とEAU誘導後16日目の所属リンパ節由来CD3陽性T細胞またはCD4陽性T細胞で共培養し、IRBP抗原刺激により抗原特異的IFN-γ及びIL-17産生をELISA法で調べた。RPE存在下ではCD3陽性T細胞のIRBP抗原特異的IFN-γ及びIL-17産生によるが低下していた。一方、CD4陽性T細胞のIRBP抗原特異的IFN-γ及びIL-17産生では影響がなかった。
EAUにおいて、EAU誘導後のコントロールマウスとNmU欠損マウス（NmU KO）におけるIRBP抗原特異的IFN-γ及びIL-17産生を比較したところ、NmU KOで減少していた。眼においてはIFN-γ及びIL-17、MCP-1などのケモカインの遺伝子発現がKOで上昇しており、それに一致して炎症細胞浸潤がKOで増加していた。また、CD4陽性細胞をNmU KO、脾臓細胞をコントロールマウス由来にしたところ、CD4陽性細胞をコントロールマウス、脾臓細胞をNmU KO由来の場合と比し、抗原特異的IFN-γ及びIL-17産生が有意に減少していたところから、EAUにおけるNmUの関与はCD4陽性T細胞側にあることが示唆された。
NmU欠損マウスにおけるEAUの眼における炎症惹起作用と所属リンパ節での免疫応答減弱の解離のメカニズムの解析について、後述の実験計画を検討中である。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

NmU欠損マウスにおけるEAUの眼における炎症惹起作用と所属リンパ節での免疫応答減弱の解離のメカニズムの解析が遅れている。

今後の研究の推進方策

NmU欠損マウスにおけるEAUの眼での炎症惹起作用と所属リンパ節での免疫応答減弱の解離のメカニズムの解析において、IRBP-tetramerの作製を検討中である。
所属リンパ節から眼内への抗原特異的CD4陽性T細胞の集積が生じている可能性を考えている。抗原特異的tetramerを使用したフローサイトメトリーにより、眼内への抗原特異的CD4陽性T細胞の割合の増加、所属リンパ節での割合の減少が検出できる可能性がある。
また、抗原特異的tetramerにより抗原特異的CD4陽性T細胞のソーティングが可能となれば、EAU誘導後のNmU KOにおけるIRBP抗原特異的IFN-γ及びIL-17の低下が、所属リンパ節での原特異的CD4陽性T細胞の割合の減少を反映していることを明らかにする一助となる可能性がある。
眼内への抗原特異的CD4陽性T細胞の集積に関与するケモカインなどの液性因子の探索を行う予定である。
また、RPEよりもIPEの方が免疫抑制作用が強いとの報告がある。そのため、IPEの分離培養を行い、in vitroにおいてIPEによる抗原特異的CD4陽性細胞のIFN-γ及びIL-17産生などの免疫抑制能を明らかにすることができる可能性がある。

次年度使用額が生じた理由

NmU欠損マウスにおけるEAUの眼における炎症惹起作用と所属リンパ節での免疫応答減弱の解離のメカニズムの解析が遅れている。

次年度使用額の使用計画

NmU欠損マウスにおけるEAUの眼での炎症惹起作用と所属リンパ節での免疫応答減弱の解離のメカニズムの解析において、IRBP-tetramerの作製を検討中である。所属リンパ節から眼内への抗原特異的CD4陽性T細胞の集積が生じている可能性を考えている。抗原特異的tetramerを使用したフローサイトメトリーにより、眼内への抗原特異的CD4陽性T細胞の割合の増加、所属リンパ節での割合の減少が検出でする。
また、抗原特異的tetramerにより抗原特異的CD4陽性T細胞のソーティングし、EAU誘導後のNmU KOにおけるIRBP抗原特異的IFN-γ及びIL-17の産生をコントロールマウスと比較する。
眼内への抗原特異的CD4陽性T細胞の集積に関与するケモカインなどの液性因子の探索を行う。

研究成果

• [雑誌論文] Investigation of association between IL10 gene polymorphisms and Vogt-Koyanagi-Harada disease in a Japanese population. (2017)
  • 著者名/発表者名: Higashi K, Meguro A, Takeuchi M, Yamane T, Kitaichi N, Horie Y, Namba K, Ohno S, Nakao K, Sakamoto T, Sakai T, Tsuneoka H, Keino H, Okada AA, Takeda A, Fukuhara T, Mashimo H, Ohguro N, Oono S, Enaida H, Okinami S, Mizuki N.
  • 雑誌名: Ophthalmic Genet 巻: 38 ページ: 187-189
  • DOI: 10.3109/13816810.2016.1145698.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epidemiology of uveitis, caused by HTLV-1, toxoplasmosis, and tuberculosis, the three leading causes of endemic infectious uveitis in Japan. (2016)
  • 著者名/発表者名: Takeda A, Ishibashi T, Sonoda KH.
  • 雑誌名: Ocul Immunol Inflamm 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1080/09273948.2016.1253851.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Clinical features of systemic metastatic retinal lymphoma in Japanese patients. (2016)
  • 著者名/発表者名: Taki R, Takeda A, Yoshikawa H, Fukuhara T, Arita R, Suehiro Y, Che I, Kumano Y, Nakamura T, Ishibashi T.
  • 雑誌名: Ocul Immunol Inflamm 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.3109/09273948.2016.1151894.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Tenascin-C promotes angiogenesis in fibrovascular membranes of eyes with proliferative diabetic retinopathy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Y, Yoshida S, Nakama, Kubo, Ishikawa K, Nakao S, Sassa Y, Takeda A, Ishibashi T, Sonoda KH.
  • 雑誌名: Mol Vis 巻: 22 ページ: 436-445
  • 査読あり
• [雑誌論文] Changes in chorioretinal blood flow velocity and cerebral blood flow after endarterectomy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Enaida H, Nagata S, Takeda A, Nakao S, Ikeda Y, Ishibashi T.
  • 雑誌名: Jpn J Ophthalmol 巻: 60 ページ: 459-465
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of cytokines and transcriptional factors on solid component in irrigating solution after vitrectomy for eyes with macular hole or idiopathic epiretinal membrane. (2016)
  • 著者名/発表者名: Myojin S, Yoshimura T, Yoshida S, Takeda A, Murakami Y, Oshima Y, Ishibashi T.
  • 雑誌名: PloS One 巻: 11 ページ: e0164355
  • DOI: 1371/journal.pone.0164355.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] High-Resolution imaging by adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy reveals two morphological distinct types of retinal hard exudates. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi M, Nakao S, Kaizu Y, Kobayashi Y, Nakama T, Arima M, Yoshida S, Oshima Y, Takeda A, Ikeda Y, Mukai S, Ishiabshi T, Sonoda KH.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 19 ページ: 35127
  • DOI: 10.1038/srep35127.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 眼内悪性リンパ腫と可溶型IL-2受容体との関連について (2016)
  • 著者名/発表者名: 武田篤信, 吉川洋, 有田量一, 肱岡邦明, 疋田伸一, 清武良子, 木村和博, 吉田茂生, 川野庸一, 石橋達朗, 園田康平
  • 学会等名: 第70回日本臨床眼科学会
  • 発表場所: 京都府京都市
  • 年月日: 2016-11-03
• [学会発表] ぶどう膜炎患者への手術戦略～硝子体手術編 (2016)
  • 著者名/発表者名: 武田 篤信
  • 学会等名: 第50回日本眼炎症学会
  • 発表場所: 東京都
  • 年月日: 2016-07-02
  • 招待講演
• [学会発表] 網膜線維瘢痕化とIL-6 (2016)
  • 著者名/発表者名: 長谷川英一, 佐藤孝太, 武田篤信, 大島裕司, 中澤徹, 趙英準, 園田康平
  • 学会等名: 第50回日本眼炎症学会
  • 発表場所: 東京都
  • 年月日: 2016-07-01
• [学会発表] Clinical Features of Systemic Metastatic Retinal Lymphoma in Japanese Patients. (2016)
  • 著者名/発表者名: Clinical Features of Systemic Metastatic Retinal Lymphoma in Japanese Patients.
  • 学会等名: ARVO
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2016-05-03
  • 国際学会
• [学会発表] 実験的自己免疫性ぶどう膜炎における新しい制御性サイトカインの関与 (2016)
  • 著者名/発表者名: 武田 篤信
  • 学会等名: 第120回日本眼科学会
  • 発表場所: 宮城県仙台市
  • 年月日: 2016-04-07
  • 招待講演
• [図書] 眼科診療マイスターⅠ 診察と検査 ぶどう膜炎 細隙灯顕微鏡検査 (2016)
  • 著者名/発表者名: 武田 篤信、園田 康平
  • 総ページ数: 3
  • 出版者: メジカルビュー社
• [図書] 一目でわかる眼疾患の見分け方 ぶどう膜疾患、網膜・硝子体疾患 ベーチェット病 (2016)
  • 著者名/発表者名: 武田 篤信、園田 康平
  • 総ページ数: 2
  • 出版者: メジカルビュー社
• [図書] 眼感染症の傾向と対策 ぶどう膜・網脈絡膜疾患 ヘルペス性虹彩毛様体炎（HSV/VZV） (2016)
  • 著者名/発表者名: 武田 篤信、園田 康平
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: 医学書院