| 研究課題/領域番号 |
15K10907
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| 研究機関 | 東京歯科大学 |
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研究代表者 |
比嘉 一成 東京歯科大学, 歯学部, 助教 (60398782)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 幹細胞ニッシェ / 角膜輪部上皮 / スフェロイド |
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| 研究実績の概要 |
角膜輪部には角膜上皮幹細胞が存在し、骨髄幹細胞のようにそのニッチの存在が考えられる。これまでに１角膜輪部組織から１ヶ月以上培養可能なニッチ様構造を維持したスフェロイドの作成が可能であることを報告してきた。本研究の昨年度においては、少量角膜輪部組織からニッチ様構造を維持したスフェロイドの培養が可能であることを見出し、輪部組織の部位によってその形成能力に違いがあることもわかってきた。また、スフェロイド形成数の多い部位では比較的大きなコロニーの形成ならびにSlow cycling cellsも多く観察され、一部組織ではN-cadherinも発現していることがわかってきた。本年度においては、スフェロイドの保存条件を検討するため、研究協力者（兼子）と協力し、保存後における角膜輪部上皮増殖能への影響を検討している。作成したスフェロイドを回収し、-80C保存ならびに液体窒素保存を行った。また、保存時における保存液の量についても検討するため、これまで一般的に使わている量と少ない量とで保存し、増殖能への影響を検討した。増殖能の解析は回収したスフェロイドをシングルセルに分離し、コロニー形成能をRhodamine B染色にて観察した。今回の検討では-80Cならびに液体窒素での保存による増殖能への大きな違いは観察されなかった。また、保存液量においてもこれまでの液量と少ない保存液での保存による増殖能への大きな影響は観察されなかった。来年度においても引き続き作成したスフェロイドの保存条件の検討を行うとともに、移植法を確立し、その後の解析を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初、計画した予定でおおむね順調に進展していると考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
来年度においても引き続き作成したスフェロイドの保存条件の検討を行うとともに、移植法を確立し、その後の解析を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
一部製品の節約を行うことができたので、109,877円次年度の物品費として使用する予定である。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度においても本年度から継続して行う実験があるため、その試薬購入費として使用する。
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