| 研究課題/領域番号 |
15K10909
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| 研究機関 | 大阪医科大学 |
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研究代表者 |
喜田 照代 大阪医科大学, 医学部, 講師 (90610105)
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| 研究分担者 |
奥 英弘 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (90177163)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | アクアポリン4 / 一酸化窒素 / ミュラー細胞 / VEGF |
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| 研究実績の概要 |
昨年からの引き続きでｎを増やして実験を行った。
糖尿病黄斑浮腫の治療に抗VEGF療法が有効であるが、反復投与が必要で、なかには有効でない症例も存在し、網膜浮腫にVEGF以外の関与が予想される。水チャンネルのアクアポリン(AQP)4は網膜ミュラー細胞に発現する。そこで網膜ミュラー細胞の容積変化にVEGFとAQP4が関与するか検討した。
実験にはストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットおよび培養網膜ミュラー細胞を用いた。糖尿病ラットおよび健常ラットにVEGFあるいはPBSを硝子体注射し、灌流固定後眼球を摘出し、網膜切片を作成した。網膜切片はGFAP、VEGF、AQP4の免疫組織染色を行い、また、VEGFのウエスタンブロット解析も施行した。一方、培養ミュラー細胞は、フローサイトメーター(FACS)を用いてVEGFやTGN-020(AQP4阻害剤)の存在下で細胞容積や一酸化窒素(NO)の細胞内産生の変化について解析した。
糖尿病ラット網膜において、VEGFの免疫反応は網膜内層に強く、またAQP4も健常ラットより増強した。そして、AQP4の発現はGFAPと共染色した。VEGFの蛋白レベルは糖尿病ラットで健常ラットより31.5%有意に増加した。FACS解析ではVEGFに暴露したミュラー細胞の細胞容積は増大し、TGN-020によりその増大は抑制された。また、細胞内NOはVEGF暴露により増加し、TGN-020により抑制された。また、昨年の実験に加えてNO合成酵素阻害剤のL-NAMEによる検討も行ったところ、L-NAMEによってもTGN-020投与時と同様の結果が得られた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究結果は、今年の日本眼科学会総会で発表し、論文も掲載された。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は網膜の血管の細胞についても同様の実験系で検討し、またvivo実験ではレーザースペックル法を用いてラットの網脈絡膜や視神経乳頭血流への影響について検討したいと思う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次の実験系として、アクアポリン4の眼循環に与える影響を検討するため、網膜血管の培養細胞の購入や培養に必要な薬剤、物品の追加購入、またレーザースペックルの機器が不調にて装備費が必要のため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
アクアポリン4の眼循環に与える影響を検討するため、レーザースペックル装置を完備してvivo実験を行う。また、網膜血管細胞についても前回同様FACS解析やウエスタンブロット解析等を行う予定である。
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