2015 年度実施状況報告書

MicroRNAとマクロファージ異常：難治性創傷の炎症遅延に及ぼす影響

研究課題

研究課題/領域番号	15K10943
研究機関	宮崎大学
研究代表者	マドゥエスタラダ宮崎大学, 医学部, 助教 (80381078)
研究期間 (年度)	2015-04-01 – 2018-03-31
キーワード	難治性創傷 / マクロファージ / microRNA
研究実績の概要	本研究では、難治性創傷においての炎症期の遅延におけるmicroRNAとマクロファージの変換異常との関連性をあきらかにすることを目的とした。難治性創傷が低酸素（hypoxia)環境に盛んでいるため、hypoxia条件でのマウスマクロファージ細胞を用いたin vitro実験を行いました。RealTime PCR法を利用してHypoxiaによる様々なmicroRNAの発現変換を検定した。MicroRNAの中でmiR-21,miR-27a, miR-29a, miR-29b, miR-146, miR-146bの発現変換が見られた。さらに、増殖因子であるTGFbeta1又抗炎症剤であるsulforaphaneにより影響受けていることも分かりました。miR-21の場合、解析したところprimary miR-21, precursor miR-21, mature miR-21-5p, mature miR-21-3pそれぞれがhypoxiaの影響を受けていることが確認しました。マクロファージのM1(炎症性)マーかー蛋白質（TNFalpha, iNOS, interleukin-6)又はM2(抗炎症性）マーカー蛋白質(interleukin-10, Arginase1, interleukin-4)の発現もRealTime PCRおよびImmunoblot法により検定を進みました。現在、M1.M2マーカー蛋白質の発現と各microRNA(miR-21,miR-27a, miR-29a, miR-29b, miR-146, miR-146b)の発現が関連しているかを検定するところである。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由本研究では、難治性創傷においての炎症期の遅延におけるmicroRNAとマクロファージの変換異常との関連性をあきらかにすることを目的とした。マクロファージ細胞をもちいた実験でHypoxia環境で様々のmicroRNAと炎症性マーカー蛋白質の発現変換が確認することができた。現在、M1.M2マーカー蛋白質の発現と各microRNAの発現が関連しているかを検定するところである。
今後の研究の推進方策	今後の研究計画は、発現変換されたmicroRNAのantagonist又は前駆物質をマクロファージ細胞内へ導入し、それぞれmicroRNAノックダウン又は過剰発現させた細胞を作成する。M1マクロファージのM2へとの変換をFlowcytometry, RealTime PCR,免疫ブロット法によりけんていする。さらに、強く関与しているmicroRNAを用いてin vivo実験へ進む。糖尿病性マウスを用いて難治性創傷を作成し、選んだmicroRNAのantagonist又は前駆物質を投入し、創傷治癒に影響及ぼすかどうかを調べる。得られた結果を取りまとめ学会発表を行う。