| 研究課題/領域番号 |
15K11005
|
|---|
| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
|---|
研究代表者 |
柴田 俊一 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (80187400)
|
|---|
| 研究分担者 |
田巻 玉器 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 研究員 (50397709) [辞退]
依田 浩子 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (60293213)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| キーワード | ヒアルロン酸 / ヒアルロン酸合成酵素 / 歯胚 / in situ hybridization |
|---|
| 研究実績の概要 |
2015年度はマウス歯胚発育過程におけるHA synthase (Has)1-3 mRNAの発現に関し、 リアルタイムPCR法による定量解析と、in situ hybridization 法による発現パターンの経時変化の解析を行った。その結果 Has1 mRNA の発現はほとんど認められず、Has2 mRNA は歯胚周囲の間葉組織、Has3 mRNA はエナメル器とはじめとする上皮組織に特異的に発現が認められた。Has2 mRNA の発現は経時的に減少し、生後ではほとんど認められなかった。特にHas3 mRNAに関しては歯根形成を制御するヘルトビッヒ上皮鞘 (HERS) および stem cell nicheとして認識される切歯のapical budにも発現が認められた。また HA-binding protein を用いた組織化学的手法により合成されたHAの存在部位の検索を行ったところ、上皮、間葉両者とも HERS や apical bud をはじめとする様々な部位に陽性反応が認められた。その発現は Has2 あるいは Has3 遺伝子発現部位と共存する部位としない部位があることも明らかとなった。以上のことから各 Has 分子のうち特にHas3が歯胚発育、特に生後における歯根形成やapical bud の構造維持に関与している可能性が明らかとなった。以上の結果は論文にまとめて投稿し、現在リバイスを行っているところである。またHA分解酵素のうち Hyal-1, -2、HA受容体であるCD44、RAHMMの遺伝子発現の局在を、in situ hybridization で検索も行ったが歯胚形成過程における強い遺伝子発現は認められなかった。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
マウス切歯、臼歯両者の歯胚発育過程における Has 遺伝子の発現パターンの経時的変化が in situ hybridization 法で明らかになり、論文にまとめてリバイス中である。器官培養の実験もすでに基本の系を確立させており、あとは必要な試薬を添加して解析をする段階となっている。以上のことから実験計画は概ね順調に進展していると判断した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
本年度は器官培養の系にHA合成阻害薬 4-メチルウンベリフェロン (MU) を添加するか、各 Has 遺伝子のアンチセンスオリゴあるいは siRNA を添加して歯胚形態形成への影響を検索する予定となっている。さらに歯胚全体あるいは上皮と間葉を分離後 3H-グルコサミンを培地に添加する事で metabolic labeling を行い、合成されたHA量を定量するとともに分子量の測定、分解酵素による分解産物の構造解析も行う予定である。さらに歯胚の器官培養系で石灰化組織を誘導する系の開発にも取り組み、石灰化に対するHA合成の影響も検索する予定である。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
別予算を用いて当初購入予定の器具が購入できたため、その分余裕が生じたことと論文掲載費用が想定よりかからなかったことで次年度使用額が生じた。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
ラジオアイソトープやオートラジオグラフィー用乳剤等の高価な試薬を積極的に購入し、それらを利用した研究を進める予定である。また論文掲載費として使用し、論文作成数を増加させる計画を立てている。
|
