| 研究課題/領域番号 |
15K11032
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| 研究機関 | 福岡歯科大学 |
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研究代表者 |
畠山 雄次 福岡歯科大学, 歯学部, 准教授 (40302161)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | アメロジェニン / ライソゾーム / 破骨細胞 |
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| 研究実績の概要 |
アメロジェニンはエナメル芽細胞により産生されるエナメル質基質タンパクであることから、エナメル質特異的タンパクと考えられてきた。しかし我々は、スプライシングアイソフォームが歯周組織に存在し、歯周組織の恒常性維持にかかわることを報告した。近年、アメロジェニンは細胞内小胞膜の膜結合型受容体LAMPsに結合することが報告されている。申請者らはアメロジェニンが歯根膜線維芽細胞を介し、破骨細胞分化抑制することからシグナル伝達因子の可能性を報告し、アメロジェニンの新たな機能を発見した。しかしその詳細な作用機序は不明である。本研究は破骨細胞分化抑制におけるアメロジェニンのシグナル伝達は、細胞膜表面に発現するLAMPsに結合し、細胞内小胞輸送により行われる可能性を検討するものである。本年度の研究計画に従い、マウスアメロジェニンスプライシングアイソフォームの一つであるLeucin rich amelogenin peptide (LRAP) の化学合成ペプチドを作製した。この合成ペプチドを水溶性溶媒に溶解後、マウス頭蓋冠由来骨芽細胞株、MC3T3細胞培地に添加し培養した結果、細胞増殖を抑制し、LAMP-1抗体添加群ではコントロール群と有意な差が認められなかった。また4週齢マウス脛骨骨端に対するLAMPsの免疫染色を行ったところ、骨芽細胞にLAMP-1陽性反応が認められた。さらに骨芽細胞は近年報告されたアメロジェニン結合タンパクあるglucose-related protein 78 (Grp78) に対して陽性反応が認められた。これらのことから骨芽細胞に発現しているLAMP-1はLRAPに対するシグナル伝達経路の一つである可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は合成ペプチドを作成後、骨芽細胞株と骨髄ストローマ細胞株の培養により合成LRAPの破骨細胞分化を評価する予定であったが、骨芽細胞株において破骨細胞分化制御因子に顕著な変化がみられなかったことから、対象細胞の変更をおこなった。このことより当初研究計画よりも若干の遅れがあると評価した。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまで、アメロジェニンスプライシングアイソフォームが歯周組織の恒常性維持に関与する可能性が示唆されていることから、当初、立案した研究計画に従い、歯根膜線維芽細胞におけるLRAPの破骨細胞分化制御因子の発現を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
試薬購入の際に複数企業間の競争的見積金額の提示により、また当初予定していた試薬の代替同等品の検討により当初の見込みより減額したことから発生した。
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| 次年度使用額の使用計画 |
引き続き破骨細胞分化に関して、マウス骨髄由来細胞における検討を行うため、実験動物の購入を行う。また破骨細胞分化制御因子の発現検討に必要なRT-PCR法およびウェスタンブロット法、等に使用する試薬の購入を行う。
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