| 研究課題/領域番号 |
15K11059
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| 研究機関 | 松本歯科大学 |
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研究代表者 |
山下 照仁 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 准教授 (90302893)
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| 研究分担者 |
二宮 禎 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (00360222)
高橋 直之 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 教授 (90119222)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 骨細胞 / 骨吸収 / 細胞分化 |
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| 研究実績の概要 |
コラーゲンゲル共存培養系を用いて骨細胞の分化誘導の培養システムを作製した。
１．骨細胞株MLO-Y4もしくは骨芽細胞をコラーゲンゲルに埋伏し、ゲル表面で頭蓋冠由来骨芽前駆細胞を共培養した。骨形成を促すために、βグリセロホスフェートとアスコルビン酸を添加した。３週間後にALP染色およびフォンコッサ染色を行ない、定量化をした。細胞増殖を評価した。その結果、MLO-Y4が埋伏したゲルは、骨芽細胞を埋伏したゲルよりもフォンコッサ染色が促進していた。一方、ALP染色はMLO-Y4側で亢進していた。上層した骨芽細胞はまだ、石灰化しているようには観察されなかった。
２．頭蓋冠器官培養系を用いた骨細胞の分化誘導を検討するために、新生児マウスの頭蓋冠から摘出した骨片を培養した。経時的に骨形成関連因子（オステオカルシン（Ocn）、I型コラーゲン、オステオポンチン、スクレロスチン、DMP1）の遺伝子発現をRT-PCRで解析した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成27年度の成果として、骨細胞まで分化する初代骨芽細胞よりも前骨細胞株のMLO-Y4の方が、共培養中の石灰化が進むことが判明した。成熟した骨細胞が分化の抑制因子を分泌していることが予想された。
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| 今後の研究の推進方策 |
新しく出来た石灰化組織中の細胞の同定・分離を試みる。上層した骨芽細胞との違いをFACSやRT-PCR法を用いて明らかにする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験機材のコラーゲンゲルの使用量が計画よりも少ない量で行なったため、追加の購入の費用が浮いた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成28年度の実験計画で追加購入し使用する予定。
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