| 研究課題/領域番号 |
15K11059
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| 研究機関 | 松本歯科大学 |
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研究代表者 |
山下 照仁 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 准教授 (90302893)
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| 研究分担者 |
二宮 禎 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (00360222)
高橋 直之 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 特任教授 (90119222)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 骨細胞 / 骨芽細胞 / 脂肪細胞 |
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| 研究実績の概要 |
１．頭蓋冠由来細胞培養系を用いた骨細胞への分化誘導を検討するために、新生児マウスの頭蓋冠から初代培養骨芽細胞を調製した。コラーゲンゲルに包埋した骨芽細胞やMLO-Y4細胞上に初代培養骨芽細胞を播種して、経時的にALP染色およびズダンIII染色をおこなった。骨芽細胞を包埋した骨芽細胞共培養は、MLO-Y4を包埋した骨芽細胞共培養よりもALPの発現が弱く脂肪滴を持った細胞が見られた。
２．Sost遺伝子レポータマウスの作成のため、ES細胞で遺伝子組換えを行ないスクリーニングした。その結果、Sost遺伝子プロモータの下流にGFPを挿入したESクローンを6ライン樹立することが出来た。現在、胚盤胞にESクローンをインジェクションしてキメラマウスの作出を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
平成27年度に引き続き平成28年度の成果として、骨細胞まで分化する初代骨芽細胞よりも前骨細胞株のMLO-Y4の方が、共培養中の石灰化が進むことの確証を得た。しかし、成熟した骨細胞が分泌している分化の抑制因子の同定にいたっていない。また、未分化な骨細胞を成熟した骨細胞と区別するためのSost遺伝子レポータマウスの作成は継続中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
上層した骨芽細胞とゲルに包埋した細胞を区別するために、DsRedやGFPを発現している動物由来の初代骨芽細胞を調製し、分化の影響を受ける細胞種を明確に区別システムで検討する。また、Sostの発現をin vivoおよびex vivoでモニター出来るようにレポータマウスの作出を推進する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
試薬の購入時に割引により繰越が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成29年度の実験計画で試薬の値上がり等に補充する予定である。
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