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本研究計画の最終年度となる平成29年度は、前年度までに得られたEpCAM陽性がん細胞の形質発現に対するEpCAMの関与を明らかにするために、EpCAM強制発現細胞株を樹立し、その性状解析をin vitroおよびin vivoにて行った。また、EpCAM発現による骨転移亢進メカニズムを明らかにするために細胞内シグナルについての検討を合わせて行った。
1. EpCAM強制発現細胞株の樹立とその性状解析： 初年度に確立した方法により分離したEpCAM低発現がん細胞にレンチウィルスを用いてEpCAM遺伝子を導入し、EpCAM強制発現細胞株を樹立した。しかしながら、EpCAM強制発現細胞株は細胞形態、遺伝子発現、sphere形成能、乳腺内での腫瘍増殖能、および骨転移能など全ての検討項目においてEpCAM低発現がん細胞と比較して有意な差は認められなかった。これらの結果から、EpCAMのみの強制発現では、間葉上皮転換の誘導には十分ではなく、EpCAM陽性細胞でみられた細胞形質の発現にはEpCAM以外の分子が関与していることが示唆された。
2. EpCAMと細胞内シグナル： EpCAMが活性化に関与することが報告されているphosphaditylinositol-3 (PI3) kinaseやExtracellular Signal-regulated Kinase (ERK)、Wnt-beta-catenin経路について、western blotまたはreporter assayにより検討したところ、EpCAM低/高発現細胞の間に差は認められなかった。よってEpCAM陽性細胞の骨転移亢進メカニズムに関与する細胞内シグナルについては、今後更なる検討が必要である。
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