| 研究課題/領域番号 |
15K11117
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
湯本 浩通 徳島大学, 大学病院, 講師 (60284303)
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| 研究分担者 |
松尾 敬志 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 教授 (30173800)
中西 正 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 准教授 (00217770)
平尾 功治 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 助教 (00581399)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 象牙芽細胞 / 自然免疫 / 遺伝子発現 / ケモカイン / ポリフェノール |
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| 研究実績の概要 |
1.象牙芽細胞要細胞株(KN-3細胞)は、real-time PCRやFACS解析にて自然免疫反応に関与するレセプターとしてNOD1が優位に発現し、そのLigandであるiE-DAP刺激に反応して、CXCL2/3やCCL20等のchemokineの産生を増強した。さらに、その経路はp38-AP-1 pathwayを介していた。
2.Polyphenols類のCaffeic Acid, Caffeic acid phenethyl ester (CAPE)やEpigallocatechin-3-gallate (EGCG)は、Streptococcus mutansに対して顕著な増殖抑制及び殺菌効果を認めなかった。しかしながら、KN-3細胞に対する細胞障害性を認めず、iE-DAP刺激によるKN-3細胞からのchemokineの産生誘導を抑制した。
3.iE-DAPで12時間刺激したKN-3細胞でのmiRNA発現変化についてMicroarray解析を行い、2倍以上発現が増減している遺伝子を特定できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
1.歯髄炎の病態・発症メカニズムや感染防御において歯髄最表層に存在する象牙芽細胞は、歯髄内でも線維芽細胞とは異なった役割を担う事が示唆されており、自然免疫反応に関与するレセプターとしてNOD1が優位に発現し、そのLigandであるiE-DAP刺激に反応して、p38-AP-1 pathway を経由してCXCL2/3やCCL20等のchemokineの産生を増強する事が明らかとなった。さらに、iE-DAPで刺激した象牙芽細胞で、2倍以上発現が増減しているmiRNA遺伝子を特定できた。
2.Polyphenols類(Caffeic Acid, CAPEやEGCG)は、象牙芽細胞に対する細胞障害性を認めず、iE-DAP刺激によるKN-3細胞からのchemokineの産生誘導を抑制したことから、安全に歯髄炎の抑制に用いる事が出来る可能性が示唆された。
当初の研究実施計画と以上の結果を考慮すると、おおむね順調に研究は進展していると評価される。
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| 今後の研究の推進方策 |
1.Microarray解析にて、iE-DAPで12時間刺激したKN-3細胞でのmiRNA発現が2倍以上増減している遺伝子に関して、その発現量をreal-time PCRにて定量的に解析を行う。
2.Polyphenols (Caffeic Acid, CAPEやEGCG)が、iE-DAPで12時間刺激したKN-3細胞でのmiRNA発現に及ぼす影響をreal-time PCRにて解析を行う。
3.象牙芽細胞様細胞(KN-3細胞)と同様に、歯髄線維芽細胞においても病原体関連分子パターン(Pattern-Associated Molecular Patterns; PAMPs)刺激によるmiRNA発現変化について解析を行う。
4.臨床サンプルとして、智歯や便宜抜髄さらには不可逆性歯髄炎にて抜髄となった歯髄組織からtotal RNAを抽出し、miRNA発現patternについてMicroarrayやreal-time PCR解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度は、これまでに使用していた培地や試薬類に加えて、Total RNA抽出・精製KitやELISA Kitが十分に残っていたために、それらの新規購入が計画当初より少なく、研究費の繰り越しが生じた。また、DNAメチル化の解析に先駆けて、まずPolyphenols類(Caffeic Acid, CAPEやEGCG)の象牙芽細胞に対する細胞障害性や自然免疫抑制作用の解析を行った事からも研究費の繰り越しが生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度は、象牙芽細胞様細胞(KN-3細胞)と同様に、歯髄線維芽細胞においても病原体関連分子パターン(Pattern-Associated Molecular Patterns; PAMPs)刺激によるmiRNA発現変化についてMicroarrayにて網羅的に解析し、歯髄内での線維芽細胞と象牙芽細胞の異なる役割や特性を解明するという更なる研究へ推進する為にも、この繰り越し分と次年度の研究費を使用する計画である。また次年度は、臨床サンプルとして、智歯や便宜抜髄さらには不可逆性歯髄炎にて抜髄となった歯髄組織を用いてmiRNA発現patternについてMicroarrayやreal-time PCR解析を行う為の試薬が必要となり、さらに学会や論文での研究成果も今年度より多く行う予定であり、これらの事項に繰り越し分と次年度の研究費を使用する予定である。
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