| 研究課題/領域番号 |
15K11246
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
山近 英樹 岡山大学, 大学病院, 講師 (10294422)
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| 研究分担者 |
辻極 秀次 岡山理科大学, 理学部, 教授 (70335628)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 骨粗鬆症 / 骨芽細胞 / 破骨細胞 / ビスフォスフォネート / リンパ球 |
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| 研究実績の概要 |
平成27年度にリセドロネートと同じビスフォスフォネート系薬剤としてゾレドロネートについて追加実験を行ったところこの2種類のビスフォスフォネート系薬剤間で全く異なる結果を得ていた。そこで詳細にT細胞、γδT細胞に与える影響を確認する目的で、複数のマウス系統について追加実験を平成28年度最初に行った。
そもそもビスフォスフォネートのT細胞への影響については、促進的に働くとするレポートと、抑制的に働くとするレポートが混在している。これらからはマウス系統の違いによりビスフォスフォネートに対するT細胞の動きが系統により異なる可能性が示されていた。
我々の結果も、Icrマウスでは、リセドロネート投与により減少傾向を示したT細胞が、C57BLマウスでは同じビスフォスフォネート系薬剤であるゾレドロネート投与により増加していた。Icrがクローズドロニー系でC57BLマウスは近交系である事を勘案して興味深い結果である。
さらにIcrマウスの血清について、マルチプレックスアッセイの解析結果からは、IL-6, TNF-α, IFNγがリセドロネート投与により増加していることが示された。また大腿骨髄細胞の解析からは、IcrマウスではT細胞が減るが、C57BLマウスでは、とりわけCD4陽性のT細胞が増えまたRUNK1の発現も増加していた。
平成28年度下旬には、T細胞にターゲットを絞り、胸腺よりT細胞を回収しIL-2添加培地で培養おこない、ゾレドロネート投与による細胞増殖曲線、notchシグナル、Ikaros, Wnt10bについてRT-PCRによるシグナル発現の解析を行う事としT細胞の培養を開始しており、平成29年度の研究へと継続している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
フローサイトメトリー解析が全般に順調で、T細胞のサブセット解析が良好に進められるようになった。この結果より骨粗鬆症治療薬のビスフォスフォネートが免疫系細胞とりわけT細胞へ影響を持つことを明らかにしている。
骨髄細胞の解析と、血清の網羅的解析のために行ったマルチプレックスアッセイはIL-6, TNF-α, IFNγがリセドロネート投与により増加することを明らかにした。
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| 今後の研究の推進方策 |
in vitroでの検証。培養T細胞にターゲットを絞り、胸腺よりT細胞を回収しIL-2添加培地で培養おこない、ゾレドロネート投与による細胞増殖曲線、notchシグナル、Ikaros, Wnt10bについてRT-PCRによるシグナル発現の解析を行う事とする。
in vivoでの検証。骨髄での骨芽細胞ニッチとのT細胞の関連精査目的にて、マウスの骨芽細胞のALCAM/Sca1蛍光2重染色により、骨芽細胞のALCAM/Sca1状態と免疫系細胞とりわけT細胞へ与える影響を精査する。具体的には骨芽細胞のALCAM/Sca1状態の違いによりCD4, CD8陽性細胞数の変化や IL-2, IL-7, TNF-α, IFN-γなどに与える影響を精査する。
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